N-Glycan Analysis of Biotherapeutic Glycoproteins using AdvanceBio Gly-X InstantPC Sample Preparation and LC/FLD/MS

Příručky | 2023 | Agilent TechnologiesInstrumentace

Příprava vzorků, Spotřební materiál, HPLC, LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS

Zaměření

Farmaceutická analýza

Výrobce

Agilent Technologies

Přejít do knihovny Zobrazit PDF

Souhrn

Význam tématu

N-glykanová analýza glykoproteinů je klíčová pro hodnocení kvality a bezpečnosti bioterapeutik protože ovlivňuje imunogenicitu farmakokinetiku a farmakodynamiku terapeutických proteinů

Cíle a přehled studie / článku

Průvodce popisuje kompletní workflow pro přípravu vzorků N-glykanů pomocí platformy Agilent AdvanceBio Gly-X InstantPC zahrnující denaturaci odštěpení N-glykanů označení barvivem InstantPC a následnou UHPLC/FLD/MS analýzu

Použitá metodika a instrumentace

Denaturace proteinu 3 min při 90 °C
Deglykozylace pomocí PNGase F 5 min při 50 °C
Označování InstantPC barvivem 1 min při 65 °C
Čištění vzorku na 96kamé desce 10–15 min při pokojové teplotě
UHPLC separace na AdvanceBio Amide HILIC kolonce s gradientem acetonitril/ammonium formátu
Detekce fluorescencí Ex285 nm Em345 nm a vysoce rozlišená MS na Agilent 6545XT Q-TOF
Softwarové zpracování v MassHunter BioConfirm

Hlavní výsledky a diskuse

InstantPC metoda umožňuje dokončení přípravy vzorku za méně než 60 minut. Fluorescenční signál i MS ionizace ukázaly výrazně vyšší citlivost ve srovnání s tradičním 2-AB značením. Analýza rituximabu a etanerceptu prokázala konzistentní separaci N-glykanů s nízkými CV pod 5 %

Přínosy a praktické využití metody

Zrychlený a standardizovaný proces pro rutinní QA/QC v biofarmaceutickém vývoji
Vysoká citlivost a reprodukovatelnost pro detekci stopových glykanových forem
Modulární formát spotřebního materiálu redukuje plýtvání a umožňuje flexibilní throughput
Kompatibilita s automatizovanými high-throughput laboratorními systémy

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrace AI-řízené analýzy dat a strojového učení pro rychlejší interpretaci glykomu
Rozšíření knihoven standardů pro přesnější identifikaci vzácných glykanů
Automatizace přípravy vzorku v plně robotizovaných platformách
Nasazení v klinické glykomice pro identifikaci biomarkerů onemocnění

Závěr

AdvanceBio Gly-X InstantPC workflow představuje komplexní řešení pro rychlou citlivou a vysoce reprodukovatelnou analýzu N-glykanů podporuje standardizaci a efektivitu bioterapeutického výzkumu a QA/QC procesů

Reference

Agilent Application Note 5994-1348EN Improved Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography for LC/FLD/MS Analysis of Released N-Glycans
Agilent Brochure 5994-1647EN N-Glycan Analysis Better Together
Agilent User Manual 5994-1231EN AdvanceBio Gly-X N-Glycan Prep with InstantPC Kit
Agilent Technical Flyer 5994-2202EN Glycan Standards
Y Xie et al High-throughput and high-sensitivity N-Glycan profiling Analytical Biochemistry 623 2021

Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.

PDF verze ke stažení a čtení

Podobná PDF

N-Glycan Analysis of Biotherapeutic Glycoproteins Using AdvanceBio Gly-X 2-AB Express Sample Preparation and LC/FLD/MS

2021|Agilent Technologies|Ostatní

Consumables Workflow Ordering Guide N-Glycan Analysis of Biotherapeutic Glycoproteins Using AdvanceBio Gly-X 2-AB Express Sample Preparation and LC/FLD/MS N-glycan analysis simplified and standardized The location and structure of N-linked glycans plays a critical role in the pharmacology of therapeutic proteins,…

Klíčová slova

glycan, glycancfg, cfglibrary, libraryglycans, glycansinfinitylab, infinitylabdescription, descriptionhilic, hilicagilent, agilentstructure, structuredry, dryadvancebio, advancebiofuc, fucgal, galfiltration, filtrationglcnac

Comparative Analysis of Agilent AdvanceBio Gly-X N-Glycan Prep

2023|Agilent Technologies|Aplikace

Application Note Pharma/Biopharma Comparative Analysis of Agilent AdvanceBio Gly-X N-Glycan Prep With InstantPC and Waters GlycoWorks RapiFluor‑MS N-Glycan Kits using select biotherapeutics Authors Abstract YashoNandini Singh and Aled Jones Agilent Technologies, Inc. Characterizing glycosylation is a necessary checkpoint during the…

Klíčová slova

ipc, ipcrfms, rfmsinstantpc, instantpcglycan, glycanglycans, glycansrapifluor, rapifluorglycoworks, glycoworksgly, glyadvancebio, advancebiolabeled, labeledorencia, orenciarelative, relativeaverage, averagekit, kitarea

N-Glycan Analysis: Better Together - Agilent and ProZyme sample preparation workflow

2020|Agilent Technologies|Brožury a specifikace

N-Glycan Analysis: Better Together Agilent and ProZyme sample preparation workflow Push Your Glycoprotein Analysis to New Levels of Performance The structure of N-linked glycans can affect the immunogenicity, pharmacokinetics, and pharmacodynamics of therapeutic proteins such as monoclonal antibodies (mAbs) and…

Klíčová slova

glycan, glycansialidase, sialidasegal, galglycanase, glycanasegalactosidase, galactosidasemannosidase, mannosidaseglycans, glycansmonoclonal, monoclonalglykoprep, glykoprepinstantdyes, instantdyesamination, aminationinstantpc, instantpcgly, glyreductive, reductiveexoglycosidases

Agilent Biocolumns - Glycan Analysis - Application Compendium

2021|Agilent Technologies|Příručky

Agilent Biocolumns Glycan Analysis Application Compendium Contents Background 2 Getting Started 3 How to Guide - Glycan Mapping 4 Featured Application Notes 1 16 Streamlined Workflows for N-Glycan Analysis of Biotherapeutics Using Agilent AdvanceBio Gly-X InstantPC and 2-AB Express Sample…

Klíčová slova

glycan, glycanreturn, returnglycans, glycanssection, sectioncontents, contentsadvancebio, advancebioinstantpc, instantpcsialic, sialicfld, fldagilent, agilentlabeled, labeledmapping, mappingassaymap, assaymapbiosimilar, biosimilarlinked