ELEMENTS OF ROBUST MODIFIED OLIGONUCLEOTIDE EXTRACTION THROUGH SPE
Postery | 2023 | Waters | AAPSInstrumentace
Extrahování a kvantifikace terapeutických oligonukleotidů v biologických vzorcích je zásadní pro pochopení jejich distribuce, metabolismu a vylučování. Robustní vzorková příprava a selektivní čištění minimalizují matriční interferenci a zajišťují přesné a reprodukovatelné DMPK údaje.
Studie se zaměřila na vývoj a validaci SPE metody pro extrakci modifikovaných i nemodifikovaných oligonukleotidů z plazmy. Hlavními cíli byly: optimalizace aniontově-výměnných sorbentů, konfigurace workflow RapiZyme Proteinase K pro odbourání proteinů a nastavení chromatografických a hmotnostně spektrometrických podmínek pro kvantifikaci.
Bylo provedeno následující:
Optimalizované sorbenty Oasis WAX prokázaly vysokou a konzistentní výtěžnost extrakce pro oba testované analyty (20-mer ssDNA a lipid-ASO). Chromatografické podmínky umožnily rozlišení diastereomerů lipid-konjugovaného ASO a přesnou detekci základního oligomeru i s nízkým podílem oxidovaných forem. RapiZyme Proteinase K dokončil odbourání plazmatických proteinů do 40 minut, což výrazně zlepšilo čistotu vzorku před SPE.
Nově vyvinutý OligoWorks SPE Kit nabízí:
Očekává se širší uplatnění multifunkčních sorbentů pro extrakci různých typů nukleových kyselin a jejich konjugátů. Integrace s automatizovanými SPE stanicemi a pokročilými MS detektory slibuje další zvýšení throughputu a citlivosti. Dále se rozvíjí alternativní proteolytické moduly a on-line čištění vzorků pro real-time bioanalytické aplikace.
Vyvinutá SPE metoda s Oasis WAX sorbentem v rámci OligoWorks SPE Kit poskytuje robustní, selektivní a reprodukovatelné řešení pro extrakci terapeutických oligonukleotidů z biologických vzorků. Kombinace optimalizované předúpravy, chromatografie a MS detekce zaručuje vysokou kvalitu bioanalytických dat.
1. www.waters.com/oligoworks
Příprava vzorků, Spotřební materiál
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceWaters
Souhrn
Význam tématu
Extrahování a kvantifikace terapeutických oligonukleotidů v biologických vzorcích je zásadní pro pochopení jejich distribuce, metabolismu a vylučování. Robustní vzorková příprava a selektivní čištění minimalizují matriční interferenci a zajišťují přesné a reprodukovatelné DMPK údaje.
Cíle a přehled studie / článku
Studie se zaměřila na vývoj a validaci SPE metody pro extrakci modifikovaných i nemodifikovaných oligonukleotidů z plazmy. Hlavními cíli byly: optimalizace aniontově-výměnných sorbentů, konfigurace workflow RapiZyme Proteinase K pro odbourání proteinů a nastavení chromatografických a hmotnostně spektrometrických podmínek pro kvantifikaci.
Použitá metodika a instrumentace
Bylo provedeno následující:
- Screening sorbentů Oasis WAX (30 µm) ve 1cc SPE kartáčcích s testovací směsí L-tyrosin, 20-mer ssDNA a lipid-konjugovaným ASO.
- Denaturační proteolýza plazmy RapiZyme Proteinase K modulem pro rozklad proteinů.
- SPE pomocí OligoWorks SPE Kit s optimalizovanou sorbentovou šarží s mixovanou reverzně-fázovou a slabou aniontovou výměnnou funkcionalitou.
- IP-RP-LC-UV analýza na ACQUITY UPLC s Oligonucleotide BEH C18 kolonkou (130 Å, 1.7 µm) při 60 °C, detekce při 260 nm s gradací TEAA/acetonitril.
- IP-RP-LC-UV-MS analýza lipid-konjugovaného ASO na BioAccord systému s RDa detektorem v negativním iontovém režimu.
- Size Exclusion Chromatography plazmy po proteolýze na ACQUITY Premier SEC 250 Å kolonce.
Hlavní výsledky a diskuse
Optimalizované sorbenty Oasis WAX prokázaly vysokou a konzistentní výtěžnost extrakce pro oba testované analyty (20-mer ssDNA a lipid-ASO). Chromatografické podmínky umožnily rozlišení diastereomerů lipid-konjugovaného ASO a přesnou detekci základního oligomeru i s nízkým podílem oxidovaných forem. RapiZyme Proteinase K dokončil odbourání plazmatických proteinů do 40 minut, což výrazně zlepšilo čistotu vzorku před SPE.
Přínosy a praktické využití metody
Nově vyvinutý OligoWorks SPE Kit nabízí:
- Reprodukovatelné a certifikované loty sorbentu pro stabilní výtěžnost extrakce oligonukleotidů.
- Kompatibilitu s nemodifikovanými i lipid-konjugovanými ASO.
- Jednoduchou integraci do IP-RP-LC-UV(-MS) workflow v bioanalytických laboratořích.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se širší uplatnění multifunkčních sorbentů pro extrakci různých typů nukleových kyselin a jejich konjugátů. Integrace s automatizovanými SPE stanicemi a pokročilými MS detektory slibuje další zvýšení throughputu a citlivosti. Dále se rozvíjí alternativní proteolytické moduly a on-line čištění vzorků pro real-time bioanalytické aplikace.
Závěr
Vyvinutá SPE metoda s Oasis WAX sorbentem v rámci OligoWorks SPE Kit poskytuje robustní, selektivní a reprodukovatelné řešení pro extrakci terapeutických oligonukleotidů z biologických vzorků. Kombinace optimalizované předúpravy, chromatografie a MS detekce zaručuje vysokou kvalitu bioanalytických dat.
Reference
1. www.waters.com/oligoworks
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
EBF: ELEMENTS OF ROBUST MODIFIED OLIGONUCLEOTIDE EXTRACTION THROUGH SPE
2023|Waters|Postery
ELEMENTS OF ROBUST MODIFIED OLIGONUCLEOTIDE EXTRACTION THROUGH SPE Makda Araya, Abraham Finny, Balasubrahmanyam Addepalli, Mandana Fasth and Matthew Lauber Waters Corporation INTRODUCTION RESULTS AND DISCUSSION Extraction and Quantification of Therapeutic Oligonucleotides (OTx) during Bioanalysis Robust extraction of modified and unmodified…
Klíčová slova
aso, asoconjugated, conjugatedsorbent, sorbentlipid, lipidspe, speoligoworks, oligoworksproteinase, proteinaserapizyme, rapizymeexchange, exchangeextraction, extractionplasma, plasmaunmodified, unmodifiedoasis, oasisoligonucleotides, oligonucleotidesoligonucleotide
Quantifying Oligonucleotides (CONSUMABLES GUIDE BOOK)
2024|Waters|Příručky
[ CONSUMABLES GUIDE BOOK ] Quantifying Oligonucleotides Sample Extraction and LC Tools for Reliable LC-MS Quantitation of Oligonucleotides A Changing Industry There has been a resurgence in synthetic oligonucleotide therapeutics in the past decade, as seen with burgeoning pipelines across…
Klíčová slova
oligoworks, oligoworksspe, speoligonucleotides, oligonucleotidesvanguard, vanguardoligonucleotide, oligonucleotidecolumn, columnbook, bookpremier, premierformat, formatfit, fitconjugated, conjugatedextraction, extractionmaxpeak, maxpeakbioanalytical, bioanalyticaldiameter
Quantification of a Lipid Conjugated Antisense Oligonucleotide (ASO) Extracted From Rat Plasma Using the OligoWorks™ SPE Microplate Kit on a HRMS System
2024|Waters|Aplikace
Application Note Quantification of a Lipid Conjugated Antisense Oligonucleotide (ASO) Extracted From Rat Plasma Using the OligoWorks™ SPE Microplate Kit on a HRMS System Nikunj Tanna, Mary Trudeau Waters Corporation Abstract Discovery bioanalysis laboratories play a critical role in the…
Klíčová slova
oligoworks, oligoworksaso, asomicroplate, microplateantisense, antisenseoligonucleotide, oligonucleotiderat, ratconjugated, conjugatedspe, spehrms, hrmslipid, lipidkit, kitplasma, plasmaextracted, extractedquantification, quantificationsystem
Improved Recovery of a Lipid Conjugated Antisense Oligonucleotide from Human Plasma using the OligoWorks™ SPE Microplate Kit and an Optimized Protocol
2025|Waters|Aplikace
Application Note Improved Recovery of a Lipid Conjugated Antisense Oligonucleotide from Human Plasma using the OligoWorks™ SPE Microplate Kit and an Optimized Protocol Mary Trudeau, Matthew A. Lauber Waters Corporation This is an Application Brief and does not contain a…
Klíčová slova
oligoworks, oligoworksconjugated, conjugatedantisense, antisensemicroplate, microplateoligonucleotide, oligonucleotidelipid, lipidprotocol, protocolplasma, plasmahuman, humanspe, sperecovery, recoverykit, kitoptimized, optimizedimproved, improvedusing
