PeptideWorks Ordering Guide

Význam tématu

Efektivní a reprodukovatelná tryptická proteolýza je klíčová pro proteomické analýzy a kvantitativní metody. S rostoucími nároky na automatizaci a konzistenci dat je nezbytné mít komplexní sady reaktorů a optimálních reagentů, které minimalizují chyby při štěpení a kontaminaci autolytickými produkty enzymu.

Cíle a přehled příručky

Cílem prezentované příručky je nabídnout flexibilní možnosti sady PeptideWorks pro tryptickou digesci proteinů s volbou denaturace, redukce a alkylace nebo bez ní. Správným výběrem mezi startovacími a doplňkovými sadami lze optimalizovat workflow pro manuální i automatizované systémy.

Použitá metodika a instrumentace

• Denaturace: Guanidin hydrochlorid (5,7 g) pro rozvolnění terciární struktury.
• Redukce: Dithiothreitol (16 mg) pro štěpení disulfidických vazeb.
• Alkylace: Iodoacetamid (53 mg) pro zabránění reoxidace cysteinů.
• Enzymatická digesce: RapiZyme Trypsin (1:5 E:P poměr), lyofilizovaný enzym skladovaný při –20 °C.
• Desalting: Sep-Pak SEC kartridže (1 cc, 96 ks) a stojan pro gravitaci.
• Chromatografie: ACQUITY Premier Peptide CSH C18 kolona (2,1×150 mm, 1,7 µm) pro následnou analýzu peptidů.

Hlavní výsledky a diskuse

Sady PeptideWorks umožňují dokončit proteolýzu za méně než 2,5 hodiny. Ve srovnání s běžnými domácími protokoly dochází k redukci vynechaných štěpení o 78 % a poklesu autolytických špiček enzymu o 98 %. Různé konfigurace sad (startovací sady s kompletními reagencemi, doplňkové sady, verze bez rozvolňovacích činidel) poskytují uživatelům variabilitu a jednoduché doplňování spotřebního materiálu.

Přínosy a praktické využití metody

• Konzistentní a automatizovatelné štěpení proteinů pro vysoce reprodukovatelná data.
• Úspora času díky rychlejší přípravě vzorku (4× rychleji než domácí protokoly).
• Snížení administrativního a logistického zatížení díky jednotně baleným sadám.
• Možnost integrace do LC-MS workflow pro rychlou identifikaci a kvantifikaci peptidů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Automatizace proteomických příprav a miniaturizace protokolů povedou k dalšímu zrychlení a snížení spotřeby reagentů. Vývoj nových enzymatických variant s cílenou specifičností a možností multiplexních digesí rozšíří využití těchto sad v biofarmaceutickém výzkumu i klinických aplikacích.

Závěr

PeptideWorks Tryptic Protein Digestion Kits nabízejí komplexní a modulární řešení pro tryptickou digesci proteinů s vysokou účinností a reprodukovatelností. Díky různým sadám a doplňkům lze přizpůsobit workflow specifickým potřebám laboratorního provozu.

Reference

Žádné explicitní reference nebyly v zdrojovém textu uvedeny.