Analysis of Aminoglycoside Antibiotics by Reversed-Phase HPLC

Význam tématu

Analýza aminoglykosidových antibiotik je klíčová pro kontrolu kvality farmaceutických přípravků, zajištění správného dávkování a detekci kontaminantů. HPLC s reverzní fází nabízí vysokou selektivitu a rychlost, což je zásadní pro rutinní laboratorní provoz.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem application note bylo vyvinout a optimalizovat chromatografické metody pro separaci jednotlivých aminoglykosidů a současně zkoumat izokratickou metodu pro šest komerčně významných sloučenin. Dále byl ověřen kvantitativní rozbor etimicinu v injekčním roztoku podle čínské farmakopeje.

Použitá metodika a instrumentace

• Technika: Reverzní fázová HPLC
• Kolona: ZORBAX StableBond SB-C18, 4.6×150 mm, 3.5 μm
• Mobilní fáze: 0.2 mol/L TFA ve vodě a methanol v poměrech od 84 % až do 95 % vody
• Detekce: evaporativní detektor světelného rozptylu (ELSD)
• Podmínky: teplota TCC 25 °C, ELSD 60 °C, tlak 3.5 bar, zisk 5, filtr 5 s

Hlavní výsledky a diskuse

• Jednotlivé metody dosáhly dokonalé separace gentamicinu, kanamycinu, etimicinu i netilmicinu s vynikajícími tvary piků a dostačujícími parametry rozlišení.
• Izokratická metoda pro šest aminoglykosidů umožnila oddělení většiny sloučenin, s možností úpravy podílu organické fáze pro lepší rozlišení slabě separovaných párů.
• Stanovení etimicinu v injekčním vzorku potvrdilo 99.5 % deklarovaného množství, v souladu s farmakopejními požadavky.
• Kalibrace ELSD detektoru vyžaduje vhodný fit dat, parabola či log-log, aby byla zajištěna přesnost měření.

Přínosy a praktické využití metody

• Metoda je rychlá, reprodukovatelná a vhodná pro rutinní kontrolu farmaceutických výrobků.
• ELSD detektor umožňuje detekci sloučenin bez chromoforu s dostatečnou citlivostí.
• Stericky chráněná kolona StableBond SB-C18 podporuje stabilitu při nízkém pH mobilní fáze.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další miniaturizace a zvýšení průtoku pro zkrácení analýz.
• Automatizace kvantifikace a rozšíření na vícekomponentní farmaceutické směsi.
• Rozvoj pokročilých detektorů kombinujících ELSD s hmotnostní spektrometrií pro větší selektivitu.

Závěr

Reverzní fázová HPLC s použitím ZORBAX StableBond SB-C18 a ELSD detektoru poskytuje efektivní a spolehlivý nástroj pro separaci a kvantifikaci aminoglykosidových antibiotik. Navržené metody splňují farmakopejní požadavky a nabízí flexibilitu pro široké uplatnění v laboratorní praxi.

Reference

1. Pharmacopoeia of the People's Republic of China, 2005, s. 740.
2. Harris Daniel, Quantitative Chemical Analysis, Macmillan, 6th Ed., 2002, s. 626.
3. Parriott Donald, A Practical Guide to HPLC Detection, Academic Press, 1993, s. 158.