A High-Throughput Method for the Analysis of 22 Substituted Phenol Isomers Using a UHPLC Column and System Combination

Význam tématu

Separace polohových izomerů substituovaných fenolů je kritická pro přesné stanovení chemického složení v environmentálních, farmaceutických a agrochemických aplikacích. Poloha substituentů na aromatickém jádru ovlivňuje fyzikálně-chemické vlastnosti látek a jejich biologickou aktivitu, proto je vysoce žádoucí metoda, která dokáže rychle a spolehlivě rozlišit i velmi podobné izomery.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo předvést výhody kombinace kolony Hypersil GOLD VANQUISH PFP 1,9 µm a systému Vanquish UHPLC pro vysokoprůchodovou separaci 22 polohových izomerů fenolů. Studie hodnotila selektivitu, opakovatelnost a kvalitu píků při zanedbatelném objemu zpoždění gradientu a nízké pulzaci čerpadla.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byla zvolena kolona Hypersil GOLD VANQUISH PFP (200×2,1 mm, 1,9 µm). Jako mobilní fáze sloužila voda s 0,1 % kyseliny mravenčí (A) a acetonitril s 0,1 % kyseliny mravenčí (B). Průtok činil 0,4 mL/min, teplota kolony byla 40 °C, objem injekce 1 µL a detekce při 270 nm. Gradient probíhal od 35 % do 45 % fáze B během 8 min s návratem na výchozí podmínky.

Použitá instrumentace

• Systém Vanquish UHPLC (Binary Pump H, Split Sampler HT, Column Compartment H, Active Pre-heater, Diode Array Detector HL)
• Virtuoso Vial Identification System a LightPipe 10 mm flow cell
• Chromeleon 7.2 SR2 MUa pro řízení a vyhodnocení dat

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila kompletní rozlišení 22 izomerů během přibližně 8 min. Fázový PFP materiál prokázal vysokou selektivitu vůči polohovým izomerům, což se odrazilo ve vynikající hodnotě rozlišení a symetrie píků (průměrné asymetrie kolem 1,1 při 100 opakovaných injekcích 2-bromofenolu). Retenční časy vykázaly nízké %RSD (<0,1 %), což svědčí o velmi stabilním průtoku a minimální pulzaci čerpadla díky inteligentnímu předkompresnímu systému.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a spolehlivá separace strukturálně podobných látek
• Výborná opakovatelnost retenčních časů a symetrie píků
• Vysoká propustnost analytů v krátkém čase (8 min)
• Možnost snadného přenosu metody mezi laboratořemi díky reprodukovatelné koloně a systému

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může směřovat k integraci této UHPLC konfigurace s hmotnostní spektrometrií pro získání strukturních informací, případně k automatizovaným on-line preparativním úpravám vzorků. Uplatnění se nabízí v monitorování mikropolutantů, farmaceutické kontrole kvality i rychlém screeningu potravinářských a biologických vzorků.

Závěr

Použití kolony Hypersil GOLD VANQUISH PFP 1,9 µm v kombinaci se systémem Vanquish UHPLC prokázalo vynikající selektivitu, stabilitu a rychlost při analýze 22 polohových izomerů fenolů. Metoda splňuje požadavky na vysokou propustnost, přesnost a reprodukovatelnost, což ji činí vhodnou pro náročné rutinní i výzkumné aplikace.

Reference

• Thermo Fisher Scientific. Application Note AN21517-EN, 2016.