UHPLC Method Development for Simultaneous Determination of Antihypertensive Combination Agents

Význam tématu

Kombinovaná antihypertenzní léčba, která spojuje látky různých tříd, se uplatňuje pro lepší kontrolu krevního tlaku a zvýšení adherence pacientů. Rychlé a spolehlivé analytické metody pro současné stanovení více účinných látek (API) jsou proto klíčové v průmyslové i klinické praxi.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout univerzální UHPLC metodu pro separaci šesti antihypertenzivních sloučenin (amlodipin besylát, hydrochlorothiazid, chlorthalidon, azilsartan, telmisartan, valsartan) do jedné minuty. Metoda využívá automatizované nástroje pro scouting mobilních fází a převod podmínek mezi rychlým a standardním režimem.

Použitá metodika a instrumentace

• UHPLC systém Thermo Scientific Vanquish: Binary Pump H, Split Sampler HT, Column Compartment H, Diode Array Detector HL, Chromeleon CDS 7.2.
• Kolona Accucore Vanquish C18+, 1,5 µm, 2,1 × 100 mm.
• Mobilní fáze: voda/formic acid 0,1 % a acetonitril/formic acid 0,1 %; gradient 5 → 90 % organiky za 1,25 min, návrat do výchozího složení do 3 min.
• Obvyklý průtok 0,4 mL/min při 50 °C, akcelerovaný režim 0,8 mL/min.
• Injekční objem 1 µL, teplota autosampléru 10 °C, detekce DAD (214, 272, 280 nm).

Hlavní výsledky a diskuse

Vyzkoušeno bylo pět kombinací mobilních fází; nejlepší separace (1,8 min pro poslední pík, rozlišení > 3) byla dosažena s 0,1 % formic acid ve vodě a v acetonitrilu. Zespélení metody dvojnásobným průtokem nevedlo k zhoršení parametrů separace a odhalilo stopový impuritní pík. Vanquish Split Sampler HT prokázal vynikající reprodukovatelnost i při nanolitrických injekcích (10 nL, RSD plochy < 5 %).

Přínosy a praktické využití metody

Díky rychlosti a robustnosti lze metodu využít v rutinním QA/QC pro screening kombinovaných antihypertenziv, snižuje čas analýzy a umožňuje detekci stopových nečistot.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším krokem je rozšíření na širší škálu kombinací API, integrace s pokročilými softwarovými nástroji pro automatizované optimalizace a využití umělé inteligence při návrhu chromatografických metod.

Závěr

Popsaná UHPLC metoda spojuje vysokou účinnost separace, rychlost a reproducibilitu injekcí v nanolitrickém rozsahu bez nutnosti úprav hardware či software. Jedna minuta analýzy šetří čas i zdroje laboratoří.

Reference

• Jones JD, Jackson SH, Agboton C, Martin TS. Pharmacy and Therapeutics. 2011;36(10):634-640.
• Thermo Fisher Scientific. Vanquish UHPLC System; 2014.
• Thermo Scientific Technical Note 161: LC Method Development by an Automated Method Scouting System; 2015.
• Thermo Scientific Technical Note 75: A Universal Tool for Method Transfer From HPLC to UHPLC; 2014.