UHPLC Method Development for Simultaneous Determination of Antihypertensive Combination Agents

Význam tématu

Antihypertenzní kombinace léků představují efektivní strategii pro řízení krevního tlaku díky synergii farmakologických účinků a zlepšení adherence pacientů jednorázovým dávkováním. Rychlá a spolehlivá analýza takových kombinací je nezbytná jak ve vývoji nových léčiv, tak v kontrole kvality finálních farmaceutických forem.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na vývoj univerzální UHPLC metody umožňující rychlé rozlišení šesti běžně kombinovaných antihypertenzních účinných látek: amlodipin besylát, hydrochlorothiazid, chlorthalidon, azilsartan, telmisartan a valsartan. Cílem bylo snížit dobu analýzy na jednu minutu při zachování vysoké rozlišovací kapacity a reprodukovatelnosti.

Použitá metodika a instrumentace

Pro vývoj metody byla použita automatizovaná scouting workflow v softwaru Chromeleon CDS 7.2, zahrnující přepínání mezi různými mobile phase kombinacemi. Klíčové parametry:

• Kolona: Accucore Vanquish C18+, 1,5 µm, 2,1×100 mm
• Pumpa: Vanquish Binary Pump H se dvěma selektory po třech kanálech
• Detektor: Diode Array Detector s multifluorescenčním polem (190–310 nm)
• Autosampler: Vanquish Split Sampler HT s výkonem pro nanolitrické injekce
• Software: Thermo Scientific Dionex Chromeleon CDS 7.2 s moduly pro metodické scouting a převod gradientu

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace pomocí pěti mobilních fází odhalila jako nejlepší kombinaci vodu s 0,1 % kyselinou mravenčí a acetonitril s 0,1 % kyselinou mravenčí. Při průtoku 0,4 mL/min a gradientu 5→90 % B za 1,25 minut byly všechny analyty separovány do 1,8 minuty s rozlišením kritické dvojice (>3). Následné zdvojení průtoku a úprava gradientu umožnila zkrácení doby analýzy na 0,9 minuty bez ztráty rozlišení. Výrazná byla také schopnost detekce neočekávané nečistoty při velmi nízkém objemu injekce (10 nL). Injekční lineární rozsah 0,01–1 µL pro jednotlivé API vykázal RSD oblasti vrcholu <5 % a korelační koeficienty >0,996.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená metoda nabízí:

• Rychlou a univerzální analýzu vícesložkových antihypertenzních přípravků
• Vysokou reprodukovatelnost i při nanolitrických objemech
• Možnost automatizovaného screeningového nasazení bez manuálních zásahů
• Šetření času a provozních nákladů díky zkrácené době analýzy

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k implementaci UHPLC metod do online monitorovacích systémů při výrobě, rozšíření na další kombinace léčiv a integraci s hmotnostní spektrometrií pro identifikaci neznámých nečistot. Využití pokročilých datových analýz a strojového učení by mohlo dále zrychlit vývoj gradientových metod.

Závěr

Popsaná UHPLC metoda dosahuje vynikající rychlosti, rozlišení i reproducibility pro simultánní stanovení šesti antihypertenzivních účinných látek. Díky automatizaci metodického scoutu a možnosti speed-upu bez ztráty kvality je vhodná jak pro rutinní QA/QC, tak pro výzkumné aplikace.

Reference

1. Jones JD, Jackson SH, Agboton C, Martin TS. Pharmacy and Therapeutics. 2011;36(10):634–640.
2. Thermo Fisher Scientific. Vanquish UHPLC System, 2014.
3. Thermo Scientific Technical Note 161: LC Method Development by an Automated Method Scouting System, 2015.
4. Thermo Scientific Technical Note 75: A Universal Tool for Method Transfer From HPLC to UHPLC, 2014.