A Combined LC-MS/MS Method for the Analysis of Aldosterone and Plasma Renin Activity in Plasma for Clinical Research using the Xevo TQ Absolute

Význam tématu

Primární hyperaldosteronismus je častou příčinou sekundární hypertenze, kdy nadměrná produkce aldosteronu vede k retenci sodíku a vody, zvýšení krevního objemu a krevního tlaku. Hodnocení renin-angiotenzin-aldosteronového systému prostřednictvím měření aldosteronu a plazmatické reninové aktivity (PRA) je klíčové pro diagnostiku a sledování účinnosti nových terapeutických zásahů v klinickém výzkumu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout a ověřit jedinou LC-MS/MS metodu umožňující současné stanovení aldosteronu a PRA v plazmatu pro potřeby klinického výzkumu. Metoda má zjednodušit analytickou sekvenci, zkrátit čas analýzy a snížit spotřebu materiálu.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava kalibrátorů: certifikovaný standard aldosteronu a angiotenzinu I v 2% BSA/PBS.
• Kontrolní materiály: in-house QC ve formě 2% BSA/PBS a K2EDTA plazmy.
• Příprava vzorků: inkubace se generačním pufrem (acetát sodný, EDTA, acetic acid, SBTI, PMSF) 3 h při 37 °C.
• Čištění vzorků: precipitace, ředění, centrifugace a SPE na Oasis™ MAX µElution 96 well destičce.
• Chromatografie: ACQUITY™ UPLC™ I-Class s kolonkou XBridge™ C8 (2,1×50 mm, 2,5 µm) za použití gradientu vody/methanolu/ammonium fluoride.
• Detekce: Waters Xevo™ TQ Absolute MS/MS v režimu MRM.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearita metody: aldosteron 10–2500 pg/mL, PRA 0,1–25 ng/mL/h.
• Analytická citlivost umožňuje kvantifikaci s přesností pod 20 % při 10 pg/mL aldosteronu a 0,1 ng/mL/h PRA.
• Opakovatelnost a celková přesnost QCs (5 běhů, n=25) vykázaly CV <10 % pro oba analyty.
• Minimální matrice efekty a žádný carry-over mezi vzorky.
• Dobrá shoda výsledků s nezávislými LC-MS/MS metodami pro aldosteron i PRA.

Přínosy a praktické využití metody

• Snížení doby a nákladů analýzy díky simultánnímu měření dvou klíčových markerů RAAS.
• Vysoká robustnost a spolehlivost v klinických studiích.
• Možnost rozšíření na měření dalších hormonů a metabolitů ve stejném běhu.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace dalších komponent RAAS a přidružených metabolitů do jednoho analytického protokolu.
• Automatizace předúpravy vzorků a SPE pro zvýšení kapacity a reprodukovatelnosti.
• Využití v personalizované medicíně při monitorování účinků nových farmak.
• Aplikace v rozsáhlých longitudinálních a epidemiologických studiích.

Závěr

Vyvinutá metoda pro simultánní kvantifikaci aldosteronu a plazmatické reninové aktivity nabízí vysokou linearitu, citlivost a přesnost s minimálními maticovými interference. Tento postup přináší efektivní řešení pro klinický výzkum systému RAAS a umožňuje rozšíření analytických možností v jednom běhu.