Simultaneous LC-MS/MS Analysis of Aldosterone and Plasma Renin Activity Using the Xevo™ TQ Absolute Mass Spectrometer for Clinical Research

Význam tématu

Aldosteron a aktivita reninu v plazmě jsou klíčovými ukazateli funkce renin-angiotenzin-aldosteronového systému (RAAS), který reguluje krevní tlak a distribuci tekutin v organismu. Precizní stanovení těchto parametrů podporuje vývoj a hodnocení nových farmakologických terapií v klinickém výzkumu.

Cíle a přehled studie / článku

Autorům šlo o vývoj jediné LC-MS/MS metody pro simultánní měření koncentrace aldosteronu a rychlosti generace angiotenzinu I (plazmatická reninová aktivita, PRA) na platformě Xevo TQ Absolute, se záměrem snížit čas i náklady analýz a zachovat vysokou citlivost a selektivitu.

Použitá metodika a instrumentace

Pro extrakci steroidu a peptidu autoři využili sorbent Oasis MAX µElution ve formátu 96-jamek. Chromatografická separace proběhla na ACQUITY UPLC I-Class FL se stacionární fází XBridge Premier Peptide BEH C18, délka běhu 3,2 minuty. Detekce byla realizována na Xevo TQ Absolute ve víceúrovňovém režimu MRM se střídáním polarity ionizace (ESI+ pro angiotenzin I, ESI– pro aldosteron). Jako interní standardy posloužily izotopicky značené deriváty.

Hlavní výsledky a diskuse

• Chromatografická retence obou analytů pod 2 minuty a nízké meziproužkové zbytky (<20 % nejnižšího kalibrátoru).
• Diluce 1:5 umožnila přesné stanovení vysokých koncentrací až 25 700 pmol/L aldosteronu a 73 nmol/L/h PRA s přesností 93–94 %.
• Absence významných interferencí při testech se strukturálně příbuznými látkami (<±15 % bias).
• Analytická citlivost do 28 pmol/L aldosteronu a 0,08 nmol/L/h PRA při RSD <20 % a S/N >10
• Přesnost (reprodukovatelnost i opakovatelnost) RSD ≤7,5 % napříč kalibračním rozsahem v BSA/PBS i lidské plazmě.
• Lineární rozsahy 22–8 328 pmol/L aldosteronu (r2 >0,995) a 0,18–70 nmol/L PRA.
• Normalizace účinku matrice pomocí interních standardů kompenzovala potlačení signálu (matrix factor 89–105 %).
• Shoda s externími referenčními EQA vzorky (Deming fit y=0,93x+2,14, bias –6,1 %) a s nezávislými LC-MS/MS metodami (Passing-Bablok y≈x, bias –6 % pro aldosteron, +21 % pro PRA).
• Srovnatelná citlivost při použití argonu i dusíku jako kolizního plynu.

Přínosy a praktické využití metody

• Jedna škálovatelná metoda místo dvou samostatných analýz
• Úspora času, reagencií a provozních nákladů
• Možnost automatizace přípravy vzorků
• Vysoká citlivost i v nízkých fyziologických koncentracích

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda může být rozšířena o další biomarkery RAAS nebo přidružené metabolity v jednoanalytických panelech. Pokročilé robotické platformy umožní plně automatizovanou přípravu vzorků ve vysokopropustném režimu. Integrace výsledků do datových platforem usnadní farmakokinetické a farmakodynamické modelování.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na Xevo TQ Absolute nabízí rychlé, citlivé a přesné simultánní stanovení aldosteronu a plazmatické reninové aktivity pro klinický výzkum. Jednoduchá příprava vzorků, vysoká reprodukovatelnost a shoda s referenčními metodami potvrzují její přidanou hodnotu v laboratorních i výzkumných aplikacích.

Reference

• Foley D, Calton LJ Simultaneous LC-MS/MS Analysis of Aldosterone and Plasma Renin Activity Using the Xevo TQ Absolute Mass Spectrometer for Clinical Research Waters Corporation 2023