Absolute Analytical Sensitivity Utilizing the new Xevo™ TQ Absolute IVD for the UPLC™- MS/MS Analysis of a Panel of Steroid Hormones for Clinical Research

Význam tématu

Steroidní hormony jsou klíčové pro regulaci metabolických procesů, zánětu a imunitních funkcí
V klinickém výzkumu je přesná a citlivá analýza těchto hormonů nezbytná pro mapování biosyntetických drah
Metody jako LC-MS/MS překonávají omezení imunoanalýz daná křížovou reaktivitou protějšků

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo ověřit analytickou citlivost a kvantitativní výkon hmotnostního spektrometru Xevo TQ Absolute IVD
Testován byl panel steroidních hormonů včetně androstendionu, 17-hydroxyprogesteronu, DHEA, progesteronu, DHT a testosteronu
Pro analýzu postačila pouhá 100 µL vzorku séra

Použitá metodika

Vzorky byly připraveny srážením bílkovin metanolem a vodou s následnou SPE extrakcí na Oasis MAX µElution destičce
Pro předúpravu se použila řešení MassTrak Endocrine Steroid Calibrator a QC s interním standardem
Chromatografická separace byla provedena na CORTECS UPLC C18 column s gradientem vody, methanolu a fluoru amonného
Detekce pomocí LC-MS/MS v režimu Multiple Reaction Monitoring pro kvantifikaci a kvalifikaci

Použitá instrumentace

• UPLC systém ACQUITY UPLC I-Class FL IVD
• Hmotnostní spektrometr Xevo TQ Absolute IVD s StepWave XS a XDR
• Liquid handling robot Hamilton STAR
• SPE destička Oasis MAX µElution
• MassTrak Endocrine Steroid Calibrator a QC set

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity kalibračních křivek s koeficienty r2 > 0,99 a odchylkami Bias ±15 % (±20 % pro nejnižší bod)
Separace isobarických látek byla úspěšná s celkovou dobou analýzy cca 7 minut
Precizita ≤6,8 % CV pro nízké, střední i vysoké úrovně QC na pěti experimentálních opakováních
Analytická citlivost dosažená na úrovních pg/mL potvrdila detekční limity 20,8 pg/mL androstendionu až 3,3 pg/mL testosteronu s S:N >10:1

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoce citlivá kvantifikace steroidů z minimálního objemu 100 µL séra
• Robustní a opakovatelná analýza isobarických sloučenin
• Jednoduchá a automatizovatelná předpříprava vzorku

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření panelu o další steroidní metabolity a konjugáty
Integrace automatizovaných pracovních postupů pro vysokou propustnost
Vývoj diagnostických aplikací s validací pro klinické použití
Využití pokročilých ionizačních technik a nových kolonk pro zlepšení citlivosti

Závěr

Metoda na bázi Xevo TQ Absolute IVD prokázala vynikající citlivost, linearitu a precizitu pro analýzu steroidních hormonů
Minimální požadovaný objem vzorku a robustnost metody ji předurčují pro náročný klinický výzkum

Reference

• Wardle R., Foley D., Hammond G. Absolute Analytical Sensitivity Utilizing the new Xevo TQ Absolute IVD for the UPLC-MS/MS Analysis of a Panel of Steroid Hormones for Clinical Research. Waters Corporation, 2023