Optimizing Fraction Collection Triggered by the Agilent 1260 Infinity Evaporative Light Scattering Detector on the Agilent Purification Systems

Význam tématu

Evaporativní detekce rozptylem světla (ELSD) je klíčová technika pro preparativní kapalinovou chromatografii cílenou na sloučeniny bez chromoforu, jako jsou aminokyseliny, peptidy, sacharidy či lipidy. Optimalizace frakčního sběru řízeného signálem ELSD umožňuje zlepšit čistotu a výtěžnost separovaných frakcí, což je zásadní pro farmaceutické, biochemické a potravinářské aplikace.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem shrnuté technické studie je ukázat postup optimalizace sběru frakcí na základě signálu Agilent 1260 Infinity ELSD. Studie popisuje nastavení systému, kalibraci zpoždění mezi detektorem a sběračem, úpravu citlivosti detektoru a parametry sběru frakcí vedoucí k maximální čistotě a výtěžku.

Použitá metodika a instrumentace

Měření a sběr frakcí probíhaly na Agilent 1260 Infinity Preparative-scale Purification LC System s následujícími komponentami:

• Preparativní pumpy G1361A a G1391A
• Preparativní autosampler G2260A
• Diodový detektor více vlnových délek (DAD) G1365D s křemennou kyvetou 0,06 mm
• Column/Valve Organizer G1383A
• Preparativní frakční sběrač G1364B vybavený Fraction Delay Sensor
• Evaporative Light Scattering Detector G4260B
• Universal Interface G1390B podporující připojení ELSD k řízení sběru
• Splitter Kit pro preparativní průtoky 8–40 mL/min (5023-2257)
• Kolonová kazeta ZORBAX SB-C18 Prep HT 21,2×100 mm, 5 µm
• Software Agilent OpenLAB CDS A.01.05 (ChemStation Edition) a Agilent Lab Advisor B.02.04

Základní kroky metodiky:

• Příprava mobilních fází (voda a acetonitril s 0,1 % kyseliny mravenčí) a standardního směsného vzorku sloučenin (kofein a řada 4-hydroxybenzoátů).
• Automatizovaná kalibrace zpoždění objemu mezi signálem ELSD a sběračem frakcí pomocí Lab Advisor Software.
• Úprava světelné intenzity ELSD (25 %, 50 %, 75 %) pro eliminaci saturace detektoru při vyšší koncentraci.
• Nastavení režimu sběru: časově řízené, špičkové (peak-based) či kombinované.

Hlavní výsledky a diskuse

Automatizovaná kalibrace pomocí Fraction Delay Sensor ukázala objem zpoždění 2 739 µL, což při průtoku 29 mL/min odpovídá časovému zpoždění ~5,7 s. Úprava intenzity světla detektoru umožnila posun prahové hodnoty sběru pod úroveň saturace signálu, čímž se zabránilo falešným spuštěním sběru. Narušení lineárního odezvy detektoru při vysoké koncentraci bylo tímto korektním nastavením potlačeno.

Přínosy a praktické využití metody

Optimalizovaná metoda zkracuje dobu kalibrace, zvyšuje spolehlivost sběru cílových frakcí a zaručuje vysokou čistotu a výtěžek. Flexibilita nastavení světelné citlivosti ELSD umožňuje adaptovat systém na různé typy vzorků a koncentrace, což je výhodné v laboratořích QA/QC, farmaceutickém či biotechnologickém průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možné směry dalšího rozvoje zahrnují integraci pokročilých algoritmů pro automatické přizpůsobení sběrových parametrů v reálném čase, využití dalších typu destruktivních detektorů v rámci stejných systémů, implementaci strojového učení pro predikci optimálních prahů sběru a rozšíření aplikací na nové třídy analytů.

Závěr

Technické shrnutí předvedlo, že kombinace automatizované kalibrace zpoždění a variabilní citlivosti ELSD na Agilent 1260 Infinity Purification Systems poskytuje robustní a flexibilní platformu pro preparativní frakční chromatografii, která maximalizuje čistotu a výtěžek frakcí.

Reference

1. Penduff P. Sample Purification Triggered with the Agilent 1260 Infinity ELSD, Agilent Technologies Application Note, publication number 5991-4041EN, March 2014.
2. Agilent Splitter Kits: Installation and Configuration Guide, publication number 5974-0158EN, February 2014.
3. Agilent 1260 Infinity Analytical– and Preparative-scale Fraction Collectors User Manual, G1364-90104, October 2013.