Analysis of High- and Low-Dosed Vitamins in a Single Run Using the Agilent 1200 Infinity Series High Dynamic Range Diode Array Detector Solution

Význam tématu

Analytická kvantifikace vysokých i nízkých koncentrací vitamínů v potravinových doplňcích představuje klíčovou výzvu v laboratorní praxi. Tradiční DAD detektory v HPLC často nedokáží zachytit současně hlavní složky (mg řád) a stopy (µg–ng řád) bez dvou oddělených běhů. Řešení s vysokým dynamickým rozsahem zkracuje dobu analýzy, snižuje náklady a zvyšuje spolehlivost výsledků.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem Application Note bylo ukázat možnost separace a kvantifikace všech vodou rozpustných vitamínů ve vitaminových tabletách (C, B1, B2, B6, B12, niacinamid, pantothenová kyselina) v jediném chromatografickém běhu. Studie demonstrovala, že Agilent 1200 Infinity Series HDR DAD rozšíří lineární dynamický rozsah schváleného systému přibližně 30×, což umožňuje současnou analýzu sloučenin v rozsahu od ng do µg a mg.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorku byly dvě efervescentní tablety rozpuštěny v 20 mL vody a 20 mL ethanolu, extrakce proběhla za tmy po dobu 10 min a roztok byl filtrovaný přes regenerovanou celulózu. Chromatografie probíhala na kolóně ZORBAX RRHT Eclipse Plus C18 (4,6×150 mm, 1,8 µm) za gradientu vodného roztoku s K2HPO4/hexansulfonátem (pH 3) a methanolu, průtokem 1,2 mL/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 2 µL.

Použitá instrumentace

• Agilent 1200 Infinity Series HDR DAD (kombinace DAD1 s 60 mm a DAD2 s 3,7 mm Max-Light flow cytely)
• Agilent 1260 Infinity Diode Array Detectors 1 a 2 (G4212B)
• Agilent 1260 Infinity Binary Pump (G1312B)
• Agilent 1260 Infinity Standard Autosampler (G1329B), ALS Cooler (G1330B)
• Agilent 1260 Infinity Column Compartment (G1316C)
• OpenLAB CDS ChemStation C.01.05

Hlavní výsledky a diskuse

• S konvenčním DAD 10 mm byl kvantifikovatelný obsah vitamínů od B1 po C, ale B12 se S/N≈4,4 ležel pod spolehlivou kvantifikací.
• S DAD 60 mm byl B12 detekovatelný (S/N≈16), ale vitamíny ve vyšší koncentraci (např. C, niacinamid) mimo lineární oblast.
• HDR DAD umožnil jednou injekcí spolehlivě analyzovat celý rozsah od 0,2 ng (B12) do 6 000 ng (C), s lineárním rozsahem až 6,7 AU/cm a dobrými parametry přesnosti (RT RSD ≤ 0,06 %, oblast ≤ 0,5 % pro hlavní složky, po stabilizaci B12 ≈ 11,5 %).
• Byla pozorována postupná dekompozice vitamínu B12 v injektorech i při chlazené vzorkovnici a naplnění vialky. Doporučuje se minimalizovat expozici vzduchu a světla.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zvyšuje laboratorní efektivitu a spolehlivost výsledků v oblasti kontroly kvality farmaceutických a potravinářských doplňků. Umožňuje ušetřit čas a materiál díky jedné univerzální analýze pro široké spektrum koncentrací.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Další rozšíření dynamického rozsahu s cílem dosáhnout kvantifikace v ještě širším rozsahu.
• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro špičkovou selektivitu.
• Automatizace přípravy vzorků a ochrana světlem/plynem pro nestabilní sloučeniny.
• Aplikace ve složitějších matricích (biologické tekutiny, potraviny, přírodní produkty).

Závěr

Agilent 1200 Infinity Series HDR DAD prokázal schopnost simultánně kvantifikovat vysokou a nízkou dávku vitamínů v jednom běhu díky více než 30× širšímu lineárnímu rozsahu. Analýza vodou rozpustných vitamínů z tablet byla úspěšná bez nutnosti separátních měření.

Reference

1. U. Kirchner, K. Degenhardt, G. Raffler, Determination of Vitamin B12 in infant formula and adult nutritionals using HPLC after purification on an Immunoaffinity column: First Action 2011.09, Journal of AOAC International, 95(4), 2012.
2. R. Amidzic et al., RP-HPLC Determination of vitamins B1, B3, B6, and B12 in multivitamin tablets, Journal of the Serbian Chemical Society, 70(10):1229–1235, 2005.
3. K. Yamada et al., Degradation of vitamin B12 in dietary supplements, International Journal for Vitamin and Nutrition Research, 78(4-5):195–203, 2008.