Separation and Determination of Liposomal and Non-Liposomal (Free) Doxorubicin from Human Plasma by SPE and LC-MS/MS

Význam tématu

Správné rozlišení a kvantifikace liposomálního a volně vázaného doxorubicinu v lidské plazmě je zásadní pro hodnocení účinnosti a bezpečnosti onkologické léčby. Metoda umožňuje sledovat distribuci léčiva, minimalizovat kardiotoxicitu a optimalizovat terapeutická dávkování.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout robustní analytický postup pro separaci a stanovení enkapsulovaného a neenkapsulovaného doxorubicinu v lidské plazmě. Metoda kombinuje inovativní solid phase extraction (SPE) s vysokoteplotní kapalinovou chromatografií a hmotnostní spektrometrií s vybraným monitorováním přechodů (SRM).

Použitá metodika a instrumentace

Celkový protokol lze rozdělit do dvou fází SPE:

• Separace liposomálního (nekoncentrovaného) a volného doxorubicinu na kartáčku SOLA HRP: liposomy procházejí bez retence, volný doxorubicin se eluuje methanolem s formiovou kyselinou.
• Disrupce liposomu a další čištění: proteinová precipitace acetonitrilem a následná SPE na SOLA HRP.

Chromatografická separace probíhá na koloně Accucore C18 (50×2,1 mm, 2,6 μm) při gradientu vody a methanolu (0,1 % formiové kyseliny) při průtoku 0,4 mL/min. Detekce se provádí na TSQ Vantage v režimu HESI-SRM, přechody m/z 544,2→361,1 pro doxorubicin a 528,2→321,1 pro interní standard daunorubicin.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla lineární kalibrace v rozsahu 1–500 ng/mL (r2 = 0,999) a mezní kvantifikační hladiny (LOQ) 1 ng/mL. Obnova extrakce byla mezi 90 – 102 %, matriční interference pod 3 %. Přesnost (RSD) u QC vzorků na třech úrovních (3, 200, 400 ng/mL) byla nižší než 10 %. Separace volné frakce doxorubicinu v přípravcích liposomálního typu odpovídala deklarovaným 1,5 – 2,5 %.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Vysokou reprodukovatelnost a čistotu extraktu díky SOLA HRP SPE.
• Sníženou spotřebu vzorku a organických rozpouštědel.
• Vysokou citlivost a nízký LOQ, vhodné pro farmakokinetické a klinické studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší využití metody pro další liposomální a nanodelivery systémy, integrace s automatizovanými platformami pro vysokoprůtokové analýzy a vývoj nových sorbentů pro zefektivnění separace biologicky aktivních látek.

Závěr

Kombinace SOLA HRP SPE, Accucore C18 kolony a TSQ Vantage hmotnostního spektrometru umožňuje efektivní a spolehlivou separaci a stanovení liposomálního a volného doxorubicinu v lidské plazmě s vynikajícími analytickými parametry.

Reference

1. US FDA Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation.