Normal phase liquid chromatography assay for vitamin K1 isomers

Význam tématu

Normal faze kapalinová chromatografie (NP-LC) představuje klíčovou techniku pro separaci nepolárních organických látek. Analýza izomerů vitaminu K1 (fytomenadionu) je důležitá pro farmaceutické aplikace, kontrolu kvality a splnění požadavků Evropské farmakopeje.

Cíle a přehled studie

Studie demonstruje možnosti systému Thermo Scientific Vanquish Core HPLC vybaveného normal phase kitem pro rutinní, spolehlivé a vysoce reprodukovatelné stanovení cis- a trans-izomerů vitaminu K1 podle monografie Ph. Eur. 10.6, 6202.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá polaritu silikagelové kolony a nepolární mobilní fáze. Klíčové parametry:

• Kolona: Thermo Scientific Hypersil Silica 5 µm, 250 × 4,6 mm
• Mobilní fáze: heptan/diisopropylether/octanol (1000:3,3:0,7 v/v/v)
• Průtok: 0,8 mL/min
• Teplota kolony: 22 °C, teplota autosampleru: 20 °C
• Objem injekce: 50 µL, koncentrace vzorku: 8 µg/mL
• Detekce: Diodový poleový detektor, 254 nm
• Příprava eluční fáze: předekvilibrace promícháním části heptanu s vodou

Instrumentace:

• Vanquish Core System: Base (VC-S01-A-02)
• Quaternary Pump CN (VC-P21-A-01)
• Split Sampler CT (VC-A12-A)
• Thermostatted Column Compartment C (VC-C10-A-03)
• Diode Array Detector CG (VC-D11-A) se standardní 13 µL cestou
• Normal Phase Kit (P/N 6036.3972)
• Chromeleon 7.3 Chromatography Data System

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda splnila požadavky Ph. Eur. na přesnost a reprodukovatelnost:

• RSD retenčních časů: 0,08 % (cis-izomer), 0,11 % (trans-izomer)
• RSD ploch píků: 0,12 % (cis), 0,09 % (trans)
• Asymetrie píků: 0,99 a 1,01 (žádné výrazné tažení)
• Rozlišení: 5,1 (nad požadavek ≥4)

Výsledky potvrzují vysokou opakovatelnost, stabilitu a rozlišovací schopnost metody.

Přínosy a praktické využití metody

NP-LC na Vanquish Core systému umožňuje rychlou a stabilní analýzu vitaminu K1 v laboratořích QA/QC a výzkumných projektech. Splňuje farmakopejní normy a přináší spolehlivé výsledky bez rizika kontaminace plastovými komponentami.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj lze očekávat v automatizaci přípravy elučních fází, redukci spotřeby rozpouštědel, miniaturizaci NP-LC, rozšíření analýzy na další nepolární vitaminy a integraci s hmotnostní spektrometrií.

Závěr

Použití normal phase kitu na systému Vanquish Core HPLC vedlo k výraznému zkrácení doby ekvilibrace, vynikající reprodukovatelnosti a rozlišení izomerů vitaminu K1. Metoda je robustní, rutinně použitelná a splňuje přísné farmakopejní standardy.

Reference

• European Pharmacopoeia 10.6: Monograph all-rac-Phytomenadione, 6202 (2022)
• Thermo Fisher Scientific: Normal phase liquid chromatography assay for vitamin K1 isomers. Application Brief 000578