Normal phase liquid chromatography assay for vitamin K1 isomers

Význam tématu

Analýza vitaminu K1 a jeho izomerů je klíčová v potravinářském, farmaceutickém i bioanalytickém průmyslu. Normal phase kapalinová chromatografie (NP-LC) umožňuje spolehlivou separaci nepolárních sloučenin a je standardní metodou podle Evropské farmacopeje.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat schopnosti systému Thermo Scientific™ Vanquish™ Core HPLC při rutinní analýze izomerů vitaminu K1 (all-rac-Phytomenadione) s ohledem na spolehlivost, reprodukovatelnost a rychlost.

Použitá metodika

Metoda vychází z monografie Ph. Eur. 10.6 a používá k separaci silikagelovou kolonu v normální fázi s mobilní fází heptan/diisopropylether/1-octanol (1000:3,3:0,7 v/v/v). Zvýšením průtoku na 0,8 mL/min se zkrátil čas analýzy a současně se zvedl provozní tlak nad 20 bar. Pro stabilní retence a plošné výtěžky byl eluent před použitím předstu­pen speciálním odvodněním: 500 mL heptanu promíchaného s 1 mL vody a následným oddělením vodních kapek, ke kterému se přidalo 500 mL neodvodněného heptanu, diisopropylether a octanol.

Použitá instrumentace

• Vanquish Core System (VC-S01-A-02)
• Quaternární pumpa CN (VC-P21-A-01)
• Split sampler CT (VC-A12-A)
• Termostatovaná kolonnová komora (VC-C10-A-03)
• Diode Array Detector CG (VC-D11-A) se standardní dutinkou (10 mm, 13 µL)
• Hypersil Silica kolona 5 µm, 250 × 4,6 mm (30005-254630)
• Normal Phase Kit (6036.3972)

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda splnila požadavky Evropské farmakopeje na reprodukovatelnost: retence cis- a trans-izomeru s RSD 0,08 % a 0,11 %, plocha píku RSD 0,12 % a 0,09 %. Asymetrie píků (0,99 a 1,01) a rozlišení 5,1 svědčí o vysoké přesnosti a spolehlivosti metody. Proces předekvilibrace elu­entu zkrátil dobu stabilizace ze 24 h na 2 h.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a spolehlivá separace vitaminu K1 v souladu s Ph. Eur.
• Vysoká reprodukovatelnost a stabilita analýzy pro rutinní QC laboratoře.
• Minimalizace expozice systému agresivním organickým solventům díky normal phase kitu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další zlepšení lze očekávat v automatizaci přípravy elu­entu, implementaci inertního zásobníku solventů a využití kapilárního omezení průtoku pro vyšší provozní tlak. NP-LC může nalézt uplatnění při analýze dalších nepolárních vitaminů, lipidů a surovin v potravinářství.

Závěr

Studie ukázala, že systém Vanquish Core s normal phase kitem poskytuje rychlou, přesnou a vysoce reprodukovatelnou metodu pro analýzu vitaminu K1 izomerů dle požadavků Evropské farmakopeje, s významným zkrácením doby předekvilibrace.

Reference

• European Pharmacopoeia 10.6, Monograph 6202: all-rac-Phytomenadione, 01/2022:3011.
• Lovejoy K., De Pra M. Normal phase liquid chromatography assay for vitamin K1 isomers. Thermo Fisher Scientific Application Brief 000578, 2022.