Analysis of Polar Compounds Using an Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 Column with Improved and Reliable Performance

Význam tématu

Polární sloučeniny se běžně vyskytují v biologických, farmaceutických a potravinářských matricích. Jejich spolehlivá separace na reverzní fází C18 je však komplikována jevem dewettingu pórů, který vede ke ztrátě retence a zdeformovaným píkům. Optimalizace stacionární fáze je proto klíčová pro přesnou a reprodukovatelnou analýzu těchto sloučenin.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyhodnotit nový Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 sloupec s upravenou C18 ligandovou vrstvou a proprietární endcappingem. Studie porovnala retenci šesti modelových polárních sloučenin a ztrátu retence po 10minutovém zastavení pumpy s výkony komerčních superficially porous C18 fází.

Použitá metodika a instrumentace

Instrumentace byla založena na Agilent 1290 Infinity LC systému.

• Binary pump (G4220A)
• Autosampler (G4226A)
• Thermostatted column compartment (G1316C)
• Diode array detektor, UV 254 nm (G4212A)

Odběry proběhly isokraticky s 100 % vodným mobilním fází (10 mM ammonium formiát, pH 3,0). Kolonne o rozměru 4,6 × 100 mm, 2,7 µm, 120 Å byla udržována při 25 °C, průtok 1,2 mL/min, injekční objem 2 µL. Po 20 min equilibration se prováděly dvakrát duplicity injekcí před i po 10minutovém zastavení pumpy.

Hlavní výsledky a diskuse

InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 prokázal nejvyšší retenci a symetrické píkypro šesti polárních sloučenin (thiourea, 5-fluorocytosin, adenine, nicotinamide, resorcinol, guanosin). Ztráta retence po pump stopu činila pouhých –1,6 %, zatímco konkurenční C18 fáze vykázaly ztráty od –4,2 % do –41,1 %. Vysoká hustota a endcapping standardních C18 kolonek vedly k významnému dewettingu a výrazné redukci retence u raných píků.

Přínosy a praktické využití metody

Nová Aq-C18 fáze umožňuje robustní a reprodukovatelnou analýzu polárních metabolitů, farmaceutik či doplňků stravy v režimu 100 % vodné fáze bez rizika dewettingu. Metoda je vhodná pro QA/QC laboratoře i akademický výzkum.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj lze očekávat v kombinaci s hmotnostní spektrometrií pro vyšší selektivitu a citlivost, ve vývoji mikroproužkových a nano-LC formátů pro miniaturní vzorky, a ve využití zelených rozpouštědel pro udržitelnou chromatografii.

Závěr

Agilent InfinityLab Poroshell 120 Aq-C18 představuje významný pokrok v separaci polárních sloučenin na reverzní fází. Díky optimalizovanému ligandovému pokrytí a endcappingu nabízí výrazně lepší retenci, symetričtější píky a minimální ztrátu retence po zastavení pumpy.

Reference

1. Bidlingmeyer B. A.; Broske A. D. The Role of Pore Size and Stationary Phase Composition in Preventing Aqueous-Induced Retention Time Loss in Reversed-Phase HPLC. J. Chromatogr. Sci. 2004, 42(2), 100–106.