Automated UHPLC method development for mebendazole and related impurities, from method scouting to robustness testing

Význam tématu
Vývoj a validace analytických metod pro stanovení léčiv a jejich nečistot je klíčový pro zajištění kvality a bezpečnosti farmaceutických přípravků. Automatizace (U)HPLC metodického vývoje přináší významné zkrácení času, snížení nákladů a minimalizaci lidské práce.

Cíle a přehled studie / článku
Úkolem bylo vytvořit automatizovaný workflow pro vývoj UHPLC metody k separaci mebendazolu a jeho souvisejících nečistot. Studie pokrývá tři hlavní fáze: scouting, optimalizaci a test robustnosti, a to s cílem dosáhnout baseline separace během 12 minut v maximálně 5denním čase.

Použitá metodika a instrumentace
Celý proces byl prováděn na systému Thermo Scientific Vanquish Flex spojeném se softwarem ChromSword Chromeleon Connect. Workflow sestával z:

• Metodické scouting – výběr kolony, pH a složení mobilní fáze na základě počtu a rozlišení špiček.
• Rychlé optimalizace – iterativní ladění gradientu, teploty kolony a průtoku k zajištění kritických rozlišení.
• Testu robustnosti – Plackett–Burmanův design k určení tolerancí změn % organického rozpouštědla, teploty a pH.

Konkrétní instrumentace
Veškeré kroky byly realizovány na Vanquish Quaternary Flex systému (moduly VF-S01-A, VF-P20-A, VF-A10-A, VH-C10-A-02, VF-D11-A) se Scouting kitem a přepínači. Detekce probíhala DAD při 250 nm. Software ChromSword Chromeleon Connect integroval řízení scouting, optimalizace i robustnosti.

Hlavní výsledky a diskuse
Po výběru kolony Hypersil GOLD (100 × 2,1 mm, 1,9 µm) a podmínkách 20 mM NH4OAc pH 4,7 s acetonitrilem 90/10 (v/v) byla dosažena baseline separace všech sedmi nečistot a API do 12 minut. Test robustnosti ukázal stabilitu metody při změnách ±1,5 %B, ±2 °C a ±0,1 pH s rozlišením >1,8.

Přínosy a praktické využití metody

• Celý vývoj metody proběhl za méně než 5 dní s výrazným omezením zásahu analytika.
• Automatizace minimalizuje variability mezi laboratořemi a usnadňuje transfer metody.
• Krátký čas analýzy (≈12 min) zvyšuje kapacitu a efektivitu rutinní kontroly kvality.

Budoucí trendy a možnosti využití
Rozvoj umělé inteligence a strojového učení dále zrychlí návrh gradientů a predikci separačních parametrů. Očekává se širší nasazení cloudových platforem pro vzdálené sledování a real-time optimalizaci. Dále poroste důraz na zelenou chromatografii a miniaturizaci analizátorů.

Závěr
Automatizovaný přístup s Vanquish Flex a ChromSword Chromeleon Connect umožnil rychlou a reprodukovatelnou UHPLC metodu pro mebendazol a nečistoty. Systematické etapizování scouting, optimalizace a robustnosti vedlo k metodě splňující ICH požadavky v rekordním čase. Tento přístup představuje vzorový příklad pro farmaceutický i průmyslový analytický vývoj.