EAS: Considerations for HILIC Method Migration

Význam tématu

Hydrophilic Interaction Chromatography (HILIC) je klíčová technika pro separaci hydrofilních látek, často využívaná v regulovaných laboratořích. Při migraci metod mezi rozdílnými chromatografickými systémy se mohou objevit neočekávané chromatografické artefakty ovlivňující spolehlivost analýzy. Rozsáhlá ověřování je potřebná, aby byly zajištěny splnění systémových požadavků na vhodnost metody.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo ukázat vliv různých složení jehličkových proplachů na separaci USP monografie pro Cetirizini hydrochlorid v HILIC režimu při přenosu metody mezi dvěma HPLC systémy (Arc HPLC System a systém od dodavatele X). Experimentální design zahrnoval porovnání chromatografických parametrů a splnění systémové vhodnosti při šesti různých poměrech acetonitril/voda pro proplach jehly.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika:

• Monografie: USP Cetirizine Hydrochloride Assay a Organic Impurities
• Fázový poměr mobilní fáze: 93:6,6:0,4 (acetonitril:voda:1 M kyselina sírová)
• Detektor: UV 230 nm
• Kolona: XBridge BEH HILIC, 4,6×250 mm, 5 µm
• Průtok: 1,0 mL/min, objem injekce 10 µL, doba běhu 10 minut
• Řešení system suitability: 4 µg/mL každé komponenty

Instrumentace:

• Systém 1: Arc HPLC System se 2489 UV detektorem a CHC autosamplerem
• Systém 2: Vendor X HPLC s vestavěným UV detektorem
• Jehličkový proplach: šest složení acetonitril/voda (93:7, 80:20, 60:40, 40:60, 20:80, 7:93)

Hlavní výsledky a diskuse

Na Arc HPLC systému nebyl zjištěn negativní vliv ani při nejvyšším podílu vody v jehličkovém proplachu. Všechny chromatogramy splňovaly kritéria pro tailing factor i rozlišení. Naproti tomu na systému Vendor X vedla vyšší vodnost proplachu k výraznému dělení špiček, což překročilo mezní hodnoty vhodnosti metody a znemožnilo správné vyhodnocení.
Hlavním mechanismem je zanechání zbytkového silného (vodného) roztoku na povrchu jehly, který při vstřiku vzorku způsobí změnu lokálního složení mobilní fáze v HILIC režimu a rozštěpení piků.

Přínosy a praktické využití metody

Optimalizace složení jehličkového proplachu je zásadní pro spolehlivost přenesených HILIC metod. Studie ukázala:

• Možnost identifikovat nevhodné autosamplerové systémy vůči vysoce vodným proplachům
• Nutnost přizpůsobit proplach metodě a mechanickému provedení systému
• Minimalizaci zdržení kvůli odstraňování zdrojových artefaktů

Budoucí trendy a možnosti využití

V následujícím vývoji lze očekávat:

• Standardizaci doporučených složení proplachů v monografiích USP pro HILIC metody
• Vylepšení autosamplerových mechanismů pro lepší kompatibilitu s vodnými roztoky
• Implementaci softwarových nástrojů pro predikci vlivu proplachu na chromatografii

Závěr

Studie demonstrovala, že jehličkový proplach může významně ovlivnit chromatografickou kvalitu HILIC separace při migraci metody mezi laboratorními systémy. Zatímco některé systémy tolerují široké spektrum složení proplachů, jiné vykazují kritické chromatografické artefakty. Správný výběr a testování proplachu je proto nezbytný pro zajištění robustní a validní analýzy.

Reference

• 1. Cetirizine Hydrochloride USPNF 2021 ISSUE 1 – online, USP43-NF38 – 910, USP42-NF37 – 891