Analysis of Charge Variant of Monoclonal Antibody

Význam tématu

Analýza nabíjecích variant monoklonálních protilátek je klíčová pro ověření kvality a konzistence terapeutických protilátek. Nabíjecí heterogenita ovlivňuje stabilitu, biologickou aktivitu a imunogenicitu mAb přípravků, což má přímý dopad na bezpečnost a účinnost léčiv.

Cíle a přehled studie / článku

Studie se zaměřuje na vývoj a ověření chromatografické metody iontové výměny (IEX) pro separaci a kvantifikaci nabíjecích variant cetuximabu jako bio-similárního vzorku. Cílem bylo dosáhnout vysoké reprodukovatelnosti a rozlišení špiček v rámci časového okna 22,5 až 32,5 minuty.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá plynulou gradientní eluci měnící pH mobilní fáze od 5,0 do 10,6 za 20 minut. Klíčové parametry:

• Kapalinová chromatografie: systém Nexera XS inert
• Kolona: Shim-pack Bio IEX SP-NP (100 mm × 4,6 mm, 3 µm)
• Mobilní fáze A: 20 mmol/L MES–HEPES–acetát (pH 5,0)
• Mobilní fáze B: 20 mmol/L MES–HEPES–acetát (pH 10,6)
• Program gradientu: 0 % B (0–15 min) → 100 % B (15–20 min) → 0 % B (20,1–30 min)
• Průtok: 0,3 mL/min, teplota kolony 25 °C
• Objem injekce: 5 µL (6násobná injekce)
• Detekce: UV při 280 nm

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila identifikovat deset nabíjecích profilů s retenčními časy od 24,69 do 29,92 min, přičemž relativní standardní odchylky (RSD) pro špičky byly nižší než 0,05 %. Rozlišení špiček prokázalo konzistentní separaci naheicky nabitých variant a adekvátní reprodukovatelnost výsledků při opakovaných injekcích.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda poskytuje robustní postup pro analýzu kvality bio-similárních mAb ve výzkumných i výrobních laboratořích. Vysoce reprodukovatelné rozlišení nabíjecích variant usnadňuje kontrolu procesů výroby a zajišťuje shodu s regulačními požadavky.

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrace hmotnostní spektrometrie (IEX–MS) by mohla dále zvýšit selektivitu a identifikaci jednotlivých variant. Dále se očekává využití pokročilých chromatografických materiálů a optimalizace gradientních programů s cílem zkrátit analýzu a snížit spotřebu elučního pufru.

Závěr

Navržená IEX metoda na Shim-pack Bio IEX SP-NP kolóně poskytuje spolehlivou a reprodukovatelnou analýzu nabíjecích variant cetuximabu. Díky vysokému rozlišení a nízké RSD je vhodná pro rutinní kontrolu kvality bio-farmaceutických produktů.

Reference

• Shimadzu Corporation: ERAS-1000-0304 (First Edition: Sep. 2022)