Simultaneous Analysis of 10 Nitrosamines in an Active Pharmaceutical Ingredient Using a Triple Quadrupole Mass Spectrometer

Význam tématu

Nitrosaminy patří mezi vysoce genotoxické a pravděpodobně karcinogenní sloučeniny, jejich přítomnost v léčivých přípravcích podléhá přísným limitům podle ICH M7, FDA i EMA.
Analytická metoda pro rychlé a spolehlivé stanovení více nitrosaminů je nezbytná pro zajištění bezpečnosti farmaceutických produktů.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit kvantitativní HPLC-MS/MS metodiku pro simultánní analýzu deseti regulovaných nitrosaminů v aktivní farmaceutické složce (API) pomocí triple quadrupole hmotového spektrometru LCMS-8060NX.
Metoda využívá externí kalibraci v rozsahu 0,1–25 ng/mL a hodnotí linearitu, přesnost a opakovatelnost.

Použitá metodika

Vzorky: extrakce API s methanolem a vodou, centrifugace a filtrace 0,22 µm PTFE injekční stříkačkou.
Chromatografie: UHPLC Nexera X3 s kolonkou Shim-pack Velox Biphenyl (100×2,1 mm, 2,7 µm); mobilní fáze A: voda/znětlá kyselina 1000:0,5, B: methanol/znětlá kyselina 1000:0,5; gradient 1 %→98 % B (0–10 min); průtok 0,6 mL/min; teplota 45 °C; objem 20 µL.
MS/MS: LCMS-8060NX s APCI sondou, MRM, napětí 4 kV; nebulizační plyn 4 L/min, sušicí 3 L/min; DL 150 °C, heat block 200 °C, interface 300 °C.

Použitá instrumentace

• UHPLC Nexera X3
• Kolonka Shim-pack Velox Biphenyl
• LCMS-8060NX triple quadrupole s APCI
• UV detektor SPD-M40 (254 nm)
• Hydrocarbon filter na dusíkovou linku
• Centrifuga, ultrazvuková lázeň, PTFE filtry

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearita pro všechny nitrosaminy: R > 0,99 v rozsahu 0,1–25 ng/mL.
• Opakovatelnost (RSD) < 10 % při 0,1 ng/mL, přesnost 80–120 %.
• Spike recovery v API: většinou 90–105 %, pouze NDBA 70–77 % vyžaduje optimalizaci přípravy.
• Rozlišení API a nitrosaminů zajištěno biphenylovou fází, rušivý pík NDMA efektivně oddělen.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda splňuje požadavky japonských, amerických a evropských regulací na nitrosaminy v léčivech. Díky vysoké citlivosti a reprodukovatelnosti lze detekovat úrovně od 0,0002 ppm v API. Současná analýza deseti sloučenin zkracuje čas a snižuje náklady v laboratorních provozech.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším krokem je optimalizace přípravy vzorků pro obtížné sloučeniny, rozšíření metody na další farmaceutické matrice a automatizace datového zpracování s využitím strojového učení. Aplikace vysoce rozlišovací MS by mohla přinést další zlepšení specificity.

Závěr

• UHPLC-MS/MS metoda s LCMS-8060NX umožnila kvantitativní stanovení 10 nitrosaminů v API s vysokou citlivostí a spolehlivostí.
• Metoda prokázala vynikající linearitu, přesnost i opakovatelnost a splňuje limity ICH M7, FDA a EMA.
• Rozšíří možnosti QA/QC v farmaceutických laboratořích pro prevenci karcinogenních nečistot.

Reference

• International Council for Harmonisation M7 (R1) Addendum: Assessment and Control of DNA Reactive (Mutagenic) Impurities in Pharmaceuticals.
• TFDA Method of Test for Nitrosamines in Medicines (LC-MS/MS), RA01I004.002.