Determine Protein Concentration Using Microvolumes with the Agilent Cary 60 UV-Vis Spectrophotometer

Význam tématu

V moderních bioanalytických laboratořích je klíčová rychlá, přesná a šetrná metoda stanovení koncentrace proteinů. Mikroobjemové spektrofotometrické techniky minimalizují spotřebu vzorku, zrychlují analýzu a omezují potenciální ztráty drahocenných látek.

Cíle a přehled studie / článku

Tento dokument demonstruje použití Agilent Cary 60 UV-Vis spektrofotometru spolu s ultra-mikroobjemovou kyvetou pro přímé stanovení koncentrace BSA (bovinní sérum albuminu) v objemech od 3 µL bez nutnosti ředění.

Použitá metodika a instrumentace

• Spektrofotometr Agilent Cary 60 UV-Vis (volitelně Cary 50)
• Ultra-mikroobjemová kyveta s vyměnitelnými zrcadlovými víčky (dráha paprsku 1,0 mm a 0,2 mm)
• Vzorek BSA (Sigma 9048-46-8)
• Minimální objem vzorku 3 µL

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineární odezva až do 2,3 Abs (s 1,0 mm víčkem) a 23 Abs (s 0,2 mm víčkem), což odpovídá 23 Abs respektive 115 Abs u standardní 10 mm kyvety.
• Přímé stanovení BSA v rozsahu 0–190 mg/mL bez dilucí.
• Mez detekce až 0,001 mg/mL při použití 10 mm dráhy.
• Výjimečná opakovatelnost a přesnost díky vylepšené fotometrické linearitě.
• Rychlé čištění pouhým otřením bez křížové kontaminace.

Přínosy a praktické využití metody

• Šetrné měření drahých a vzácných vzorků bez ztrát.
• Zrychlení analytického postupu a snížení počtu pipetážních kroků.
• Široký rozsah detekce pro nízké i vysoké koncentrace proteinů.
• Možnost automatizace se systémem měničů kyvet a regulovaných teplotních držáků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace do vysoce propustných analytických platforem pro screening proteinů.
• Aplikace na další biomakromolekuly, jako jsou DNA a enzymy, s minimálními objemy.
• Využití pokročilé datové analýzy pro procesní kontrolu v biotechnologiích.
• Vývoj kyvet z nových materiálů pro ještě menší objemy a širší spektrální rozsah.

Závěr

Spektrofotometr Agilent Cary 60 UV-Vis ve spojení s ultra-mikroobjemovou kyvetou poskytuje precizní, reprodukovatelné a úsporné stanovení koncentrace proteinů v rozsahu 0,001–190 mg/mL. Metoda minimalizuje spotřebu vzorku, zkracuje dobu analýzy a je snadno integrovatelná do automatizovaných pracovních postupů.