An Analytical Method of Paralytic Shellfish Toxins Using a Triple Quadrupole Mass Spectromete

Význam tématu

Paralytické toxiny se akumulují v mlžích a představují riziko pro veřejné zdraví. Rychlé a citlivé metody analýzy jsou nezbytné pro nahrazení testu na myších a splnění bezpečnostních limitů.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout a validovat LC-MS/MS metodu s použitím HILIC chromatografie pro simultánní analýzu 12 paralytických toxinů v mořských mlžích. Studie porovnává dva postupy extrakce a demonstruje kvantifikaci toxinů v hřebenatkách během 15 minut.

Použitá metodika

• Vzorky: hřebenatky připravené dvěma extrakčními postupy (kyselina octová 1 % vs. kyselina chlorovodíková 1 mol/L).
• Čištění pomocí SPE ENVI-Carb s elucí acetonitrilem a vodou.
• Chromatografie: HILIC kolona Amide 100×2,1 mm, 1,7 µm; mobilní fáze A: 0,015 % kyselina mravenčí a 0,015 % amoniak; B: 0,01 % kyselina mravenčí v acetonitril-vodu (7:3); gradientní program do 15 minut.
• Detekce: MRM přechody pro 12 toxinů v pozitivním i negativním režimu.

Použitá instrumentace

• Shimadzu LCMS-8060NX triple kvadrupólový hmotnostní spektrometr.
• Nexera ultra rychlý vysokotlaký kapalný chromatograf s HILIC modulem.
• ENVI-Carb SPE kazety pro čistění vzorku.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární rozsah 0,39–3,09 ng/mL (0,0004–0,0031 mg/kg) s R2 >0,994 pro všech 12 toxinů. Kromě rychlého rozlišení (<10 minut) poskytla vysokou citlivost pod regulačními limity. Porovnání extrakcí ukázalo vyšší výtěžnost a nižší matrix efekt při použití kyseliny octové oproti chlorovodíkové.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza do 15 minut na jednoduchém LC systému.
• Simultánní detekce a kvantifikace dvanácti paralytických toxinů.
• Možné nahrazení testu na myších a plnění aktuálních regulačních požadavků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Globální přechod k instrumentálním metodám bez využití zvířecích testů dle EU 2019/627.
• Dostupnost a standardizace molekulárních referenčních materiálů pro všechny analyty.
• Integrace simultánního stanovení tetrodotoxinu a dalších toxinů v jedné analýze.

Závěr

LC-MS/MS metoda s HILIC chromatografií na platformě Shimadzu LCMS-8060NX poskytuje rychlou, citlivou a spolehlivou alternativu k testu na myších pro stanovení paralytických toxinů v mlžích. Doporučenou procedurou je extrakce 1 % kyselinou octovou s následnou SPE čistící fází.

Reference

1. Boundy M. et al. J. Chromatogr. A 1387, 1–12 (2015).
2. Turner A. D. et al. J. AOAC Int. 98(3), 609–621 (2015).
3. Turner A. D. et al. J. AOAC Int. 103(2), 533–562 (2020).