Low-flow HPLC columns - Proteomics research columns

Význam tématu

Analýza proteomiky vyžaduje vysoce citlivé a reprodukovatelné chromatografické separace při nízkých průtocích. Optimalizované nízko-průtokové HPLC kolony pro LC-MS umožňují detailní charakterizaci proteinů, identifikaci posttranslačních modifikací a analýzu stopových množství vzorku.

Cíle a přehled studie / článku

Tento dokument představuje tři technologie nízko-průtokových HPLC kolon od Thermo Fisher Scientific určené pro bottom-up i top-down proteomiku. Porovnány jsou konstrukční formáty packed-bed (EASY-Spray™, Double nanoViper™) a pillar array (μPAC™), klíčové parametry a kompatibilita s U/HPLC a LC-MS systémy.

Použitá metodika a instrumentace

Využité kolony a jejich hlavní parametry:

• EASY-Spray: integrovaný emitér, click-and-spray konektor, řízení teploty, kompatibilita s Thermo Scientific MS.
• Double nanoViper: univerzální nanoViper™ fittings, zero-dead-volume spoje, oddělené emitéry.
• μPAC pillar array: pilířková struktura s průměrem částic 5 μm, interpiliér 2,5 μm, délky 50–200 cm, průtoky 0,1–15 μl/min, nízký zpětný tlak.

Hlavní výsledky a diskuse

• PepMap Neo packed-bed kolony dosahují tlakové odolnosti až 1500 bar, lepší konzistence mezi kolony a vyšší účinnosti separace.
• μPAC technologie poskytuje vynikající stabilitu retence, nízký zpětný tlak a zvýšenou robustnost emitérů.
• Double nanoViper zajišťuje jednoduché připojení, minimalizaci mrtvých objemů a širokou kompatibilitu s nízko-průtokovými systémy.

Diskuse se zaměřuje na zlepšení citlivosti LC-MS analýz, opakovatelnosti experimentů a rozšíření možností aplikací v bottom-up i top-down proteomice.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená citlivost a nižší spotřeba vzorku umožňují analýzu vzácných či množstevně omezených proteinových vzorků.
• Vysoká reprodukovatelnost a stabilita retence zjednodušují porovnávání dat napříč experimenty.
• Flexibilita konstrukčních formátů usnadňuje integraci do širokého spektra U/HPLC a LC-MS platforem.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další miniaturizace a optimalizace pilířkových struktur, vyšší tlakové provozní režimy nad 1500 bar, integrace do multimodálních separací a automatizace řízení průtoků pomocí pokročilých algoritmů a umělé inteligence.

Závěr

Nízko-průtokové HPLC kolony Thermo Fisher Scientific rozšiřují analytické možnosti proteomické výzkumné práce. Nabízejí zvýšenou citlivost, robustnost a flexibilitu a představují klíčový nástroj pro moderní bottom-up i top-down proteomiku.

Reference

• Thermo Fisher Scientific. Low-flow HPLC columns enabling high sensitivity LC-MS analysis for bottom-up and top-down proteomics research. White Paper FL000478-EN (2021).