Biosimilar Peptide Mapping Characterization and MAM Workflow Using Prototype Benchtop QTOF with an App-Based Acquisition and Data Processing Platform

Význam tématu

Peptidová mapování se řadí mezi klíčové analytické přístupy pro charakterizaci posttranslačních modifikací (PTM) biotechnologických léčiv a ověřování jejich srovnatelnosti s originálními produkty. Přesné a spolehlivé určení modifikací je nezbytné pro zajištění bezpečnosti, účinnosti a shody s regulačními normami.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat implementaci komplexního workflow pro charakterizaci peptidů a Multi-Attribute Method (MAM) u biosimilárního infliximabu na benchtop QTof systému Xevo G3. Výzkum zahrnoval srovnání inovátoru (Remicade®) s třemi biosimiláry (Inflectra®, Avsola®, Renflexis®) včetně stresového studia a kvantifikace klíčových atributů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorků byla použita redukce, alkylace a trypsinová digestace monoklonálních protilátek. Analýza proběhla na ACQUITY Premier UPLC v režimu reverzní chromatografie (RPLC) spojené s masovou spektrometrií data independent acquisition (DIA, MSE) na Xevo G3 QTof.

• Chromatograf: ACQUITY Premier UPLC
• MS detektor: Xevo G3 QTof MS
• Software pro akvizici a zpracování: UNIFI™ App Peptide Mapping a Peptide MAM App
• Informatická platforma: waters_connect pro integrované řízení dat

Hlavní výsledky a diskuse

Peptidové mapy pro originál a biosimiláry prokázaly přesah 95 % sekvenční pokrytí u všech čtyř vzorků. Srovnání PTM odhalilo zásadní rozdíly v relativním zastoupení N-glykoform a úrovních oxidace, deamidace a C-terminální lyzinové konjugace. Stresové experimenty ukázaly pouze drobné změny po dvoutýdenním zahřívání, přičemž metoda vykázala opakovatelnost lepší než 2 % RSD.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Vysokou robustnost a propustnost díky inteligentnímu potlačení šumu a redukci velikosti souborů
• Komplexní monitorování více kritických kvalitativních atributů současně
• GMP-kompatibilní workflow vhodné pro rutinní srovnávací testování biosimilárů

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj integrace s umělou inteligencí pro automatickou detekci a kvantifikaci PTM, rozšíření multiplexních aplikací na další třídy bioterapeutik a prohloubení online monitoringových přístupů v reálném čase.

Závěr

Implementované peptidové mapování s MAM workflow na Xevo G3 QTof prokázalo svou schopnost spolehlivě charakterizovat biosimilární infliximab a srovnávat ho s inovátorem. Vysoká sekvenční pokrytí, přesná kvantifikace PTM a vynikající opakovatelnost potvrzují vhodnost metody pro širší biofarmaceutickou praxi.

Reference

• DeLaney K., Ippoliti S., Reid L., Cornwell O., Yu Y. Q., Harry E., Berger S. Biosimilar Peptide Mapping Characterization and MAM Workflow Using Prototype Benchtop QTOF with an App-Based Acquisition and Data Processing Platform. Waters Corporation, 2022.