EASY-Spray and double nanoViper PepMap Neo columns - PRODUCT SPECIFICATIONS

Význam tématu

Peptidové mapování pomocí nízkoproudé chromatografie hraje klíčovou roli v moderní proteomice. Umožňuje detailní rozlišení komplexních směsí peptidů a zajišťuje vysokou kvalitu identifikace a kvantifikace proteinů. Snadné, spolehlivé a výkonné chromatografické kolony zvyšují efektivitu pracovních postupů a konzistenci výsledků v rozsáhlých experimentech i multi-site projektech.

Cíle a přehled článku

Článek popisuje technické specifikace a výkonnost kolon Thermo Scientific EASY-Spray a double nanoViper PepMap Neo v kombinaci s UHPLC a Orbitrap hmotnostním spektrometrem. Cílem je demonstrovat:

• jednoduché a bezodpadní (zero-dead-volume) připojení
• reprodukovatelnou kvalitu a robustnost při tlacích až 1500 bar
• špičkovou separaci pro rozsáhlé bottom-up proteomické aplikace

Použitá metodika a instrumentace

Chromatografické kolony byly testovány v přímé injekční konfiguraci s 200 ng digestu HeLa buněk. Pro separaci byly využity:

• Thermo Scientific EASY-Spray PepMap Neo Columns (75 µm I.D. × 750 mm)
• Double nanoViper PepMap Neo Columns (75 µm I.D. × 500 mm)
• Thermo Scientific Vanquish Neo UHPLC System
• Thermo Scientific Orbitrap Exploris 480 Mass Spectrometer

Hlavní výsledky a diskuse

Testy ukázaly vysokou reprodukovatelnost identifikace a kvantifikace:

• Peptidové ID a kvantifikace se pohybovaly kolem 90 000 identifikací a 7 000 kvantifikací proteinů napříč čtyřmi EASY-Spray kolónami
• Retenční časy, šířka vrcholu a symetrie zůstaly konzistentní po 500 injekcích u double nanoViper kolón
• Maximální provozní tlak 1500 bar vedl k lepší špičaté separaci a vyšší kapacitě vzorku

Přínosy a praktické využití metody

Tyto kolony poskytují:

• Rychlé, opakovatelné a bezodpadní spojení, které minimalizuje mrtvý objem
• Vysokou pevnost a stabilitu při dlouhodobém provozu
• Lepší proteomické pokrytí díky vysoké efektivitě separace a tlaku

Budoucí trendy a možnosti využití

Ve vývoji proteomiky se očekává:

• Integrace ještě delších a užších kolon pro hlubší proteomické profily
• Pokrok ve vnitřní teplotní kontrole kolony pro snížení viskozity a tlaků
• Automatizace spojovacích postupů a online reálné kontroly kvality spojení

Závěr

EASY-Spray a double nanoViper PepMap Neo kolony v kombinaci s Vanquish Neo UHPLC a Orbitrap Exploris 480 nabízejí vynikající reprodukovatelnost, vysokou kapacitu a robustnost při provozu až na 1500 bar. Díky jednoduchému připojení a optimalizované výrobě představují silný nástroj pro pokročilé bottom-up proteomické aplikace.

Reference

• Thermo Scientific Technical Note TN74152