LC-MS/MS Method for the Determination of Steroids from Urine Using SOLA and Core Enhanced Technology Accucore HPLC Column

Význam tématu

Stanovení steroidů v moči, konkrétně hydrokortisonu, kortisonu, kortikosteronu a 11-α hydroxyprogesteronu, je klíčové pro klinickou diagnostiku, bioanalytické studie a monitorování hormonálních hladin. Efektivní příprava vzorku a rychlá, vysoce účinná chromatografická separace umožňují spolehlivou kvantifikaci i při nízkých koncentracích, což zlepšuje kvalitu dat a zvyšuje produktivitu laboratoří.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce je demonstrovat aplikaci Thermo Scientific SOLA SPE well plates pro extrakci steroidů z moči a jejich rychlou separaci na Accucore RP-MS kolonně s následnou kvantifikací pomocí LC-MS/MS. Studie hodnotí linearitu metody, přesnost, opakovatelnost a úroveň carryover.

Použitá metodika a instrumentace

Sample preparation:

• Podmínění SPE: 1 mL methanolu, 1 mL vody
• Aplikace vzorku: 1 mL moči s interními standardy corticosterone a 11-α hydroxyprogesterone, 1 mL moči pro hydrokortison a kortison
• Washing: 200 µL methanol:voda (20:80 v/v)
• Eluce: 2×200 µL methanolu
• Evaporace a rekonstituce: vysušení dusíkem a rekonstituce v 200 µL vody

Chromatografie:

• Kolona: Accucore RP-MS 2.6 µm, 100×2.1 mm
• Eluční fáze: voda a acetonitril s 0.1 % kyseliny mravenčí
• Gradient: 25 % B do 4 min, 75 % B do 4.5 min, návrat na 25 % B do 4.51 min, doba běhu 6 min
• Průtok: 0.6 mL·min⁻¹, teplota 25 °C, objem injekce 2.5 µL

MS/MS podmínky:

• MS zařízení: Thermo Scientific TSQ Vantage s HESI ionizací v pozitivním režimu
• Optimalizace kolizní energie a S-lens pro jednotlivé přechody m/z
• Nastavení teplot: vaporizer 300 °C, kapilára 300 °C, plynné plyny podle doporučení výrobce

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific Accela HPLC
• Sloupec Accucore RP-MS 2.6 µm, 100×2.1 mm
• Thermo Scientific TSQ Vantage MS/MS
• Software Thermo Scientific LC QUAN

Hlavní výsledky a diskuse

• Separace všech čtyř analytů v čase pod 3 minuty
• Linearita 1–1000 ng·mL⁻¹ s r² nad 0.99 (hydrokortison 0.9937, kortison 0.9981, kortikosteron 0.9998, 11-α hydroxyprogesteron 0.9992)
• Endogenní hladiny v moči: hydrokortison 17.3 ng·mL⁻¹ (RSD 11.1 %), kortison 55.6 ng·mL⁻¹ (RSD 7.4 %)
• QC vzorky pro kortikosteron a 11-α hydroxyprogesteron: RSD < 3 % pro 15 a 600 ng·mL⁻¹
• Recovery: kortikosteron 131.2 %, 11-α hydroxyprogesteron 130.8 %
• Carryover zanedbatelné (< 14 % signálu S1)

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká reprodukovatelnost a čistota extraktů
• Rychlá analýza vhodná pro high throughput aplikace
• Nižší spotřeba rozpouštědel a nákladů
• Možnost nasazení v klinických a toxikologických laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace a miniaturizace SPE procesů
• Rozšíření metod na další třídy bioaktivních látek
• Integrace s HRMS pro širší spektrum detekce
• Další vývoj core-shell technologií pro specializované aplikace

Závěr

Metoda využívající SOLA SPE well plates a Accucore RP-MS kolony prokázala výbornou linearitu, přesnost, opakovatelnost a nízké carryover při stanovení steroidů v moči. Díky rychlosti a spolehlivosti je vhodná pro náročné bioanalytické a klinické aplikace.

Reference

Žádné další literatury neuvedeno.