LC-MS/MS Method for the Determination of Steroids from Urine Using SOLA and Core Enhanced Technology Accucore HPLC Column

Význam tématu

Steroidní hormony jako kortison, hydrokortison, kortikosteron a 11-α hydroxyprogesteron jsou klíčové pro biochemické a klinické analýzy při sledování endogenních hladin i terapeutického řízení.
Rychlá a spolehlivá separace z komplexních biologických matrix, jako je moč, vyžaduje efektivní extrakční a chromatografické techniky, které minimalizují interferenci a zkracují dobu analýzy.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo demonstrovat kombinaci SOLA SPE 96-jamkových destiček s Accucore RP-MS HPLC kolonou pro extrakci, separaci a kvantifikaci čtyř progesteronových steroidů z moči pomocí LC-MS/MS.
Studie se zaměřila na rychlost separace (méně než 3 minuty), linearitu standardních křivek (1–1000 ng/ml) a reprodukovatelnost výsledků.

Použitá metodika

• Příprava vzorku: SOLA 96-well SPE destičky; kondice 1 ml methanolu, 1 ml vody; aplikace 1 ml moči se standardy; praní 200 μl 20:80 (methanol/voda); eluování 2 × 200 μl methanolu; sušení a rekonsitituce v 200 μl vody.
• Chromatografie: Accucore RP-MS (100 × 2.1 mm, 2.6 μm); mobilní fáze A: voda + 0.1% formic acid, B: acetonitril + 0.1% formic acid; gradient z 25 % B na 75 % B během 4 minut; průtok 0.6 ml/min; teplota 25 °C; objem injekce 2.5 μl.
• MS/MS detekce: TSQ Vantage s HESI v pozitivním režimu; napětí 3000 V; teplota vaporizeru 300 °C; tlak srážecího plynu 1.5 mTorr; scan time 0.02 s; optimalizované prekurzorové a produktové ionty pro každou sloučeninu.

Použitá instrumentace

• Extrakce: SOLA SPE 96-well plates (Thermo Fisher Scientific).
• LC systém: Thermo Scientific Accela s Accucore RP-MS kolonu (100 × 2.1 mm, 2.6 μm).
• MS/MS: Thermo Scientific TSQ Vantage, HESI ionizace.
• Software pro zpracování dat: Thermo Scientific LC QUAN.

Hlavní výsledky a diskuse

• Separace čtyř steroidů byla dokončena za méně než 3 minuty s ostrými, symetrickými píky.
• Lineární rozsahy 1–1000 ng/ml s koeficienty r2: kortison 0.9981, hydrokortison 0.9937, kortikosteron 0.9998, 11-α hydroxyprogesteron 0.9992.
• Endogenní hladiny v moči: hydrokortison 17.3 ng/ml (RSD 11.1 %), kortison 55.6 ng/ml (RSD 7.4 %).
• QC při 15 a 600 ng/ml vykázaly RSD < 3 %; recovery pro kortikosteron a 11-α hydroxyprogesteron ~130 %; žádný významný carryover.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou propustnost, nízkou spotřebu rozpouštědel, čisté extrakty a krátký čas analýzy, což ocení klinické laboratoře, toxikologické a farmakokinetické studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metodiky na širší spektrum steroidů a metabolitů.
• Automatizace přípravy vzorku a integrace s robotickými platformami.
• Nové fázové materiály pro zvýšení selektivity ve složitých matrixech.
• Použití v personalizované medicíně a monitorování terapeutických režimů.

Závěr

Kombinace SOLA SPE destiček a Accucore RP-MS kolony poskytuje rychlý, citlivý a reprodukovatelný postup pro stanovení klíčových steroidních hormonů v moči pomocí LC-MS/MS s minimálním carryover a vysokou kvalitou dat.

Reference

• MacRitchie E., Phipps K. LC-MS/MS Method for the Determination of Steroids from Urine Using SOLA and Core Enhanced Technology Accucore HPLC Column. Thermo Fisher Scientific Application Note ANCCSSOLASTDS, 2011.