LC-MS/MS Method for the Determination of HCTZ and Losartan from Human Plasma Using SOLA CX

Význam tématu

Stanovení léčiv hydrochlorothiazidu (HCTZ) a losartanu v lidské plazmě je klíčové pro monitorování farmakokinetiky, účinnosti léčby hypertenze a bezpečnosti pacientů. Vysoce selektivní a citlivé metody, které zkracují dobu analýzy a minimalizují spotřebu vzorku a rozpouštědel, zvyšují efektivitu bioanalytických a klinických laboratoří.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem bylo ukázat výkon nových kartridží SOLA CX pro extrakci HCTZ a losartanu z lidské plazmy a demonstrovat rychlou separaci pomocí kolony Accucore aQ v rámci LC-MS/MS analýzy během dvou minut.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorků byla aplikována pevná fáze extrakce (SPE) s kartridžemi Thermo Scientific SOLA CX (10 mg/1 mL). Postup extrakce:

• Podmínění kartridže: 1 mL methanolu, 1 mL vody
• Aplikace: 100 µL plazmy se standardy
• Proplach: 200 µL vody s 0,1 % kyseliny formiové
• Eluce: 200 µL acetonitrilu s 3 % amoniaku
• Sušení a resuspendace v 100 µL směsi vody/acetonitrilu (80:20, v/v)

Separace LC-MS/MS:

• Chromatograf: Thermo Scientific Accela 600
• Kolona: Accucore aQ, 2,6 µm, 50 × 2,1 mm
• Mobilní fáze A: voda + 0,1 % formiové kyseliny; B: acetonitril + 0,1 % formiové kyseliny
• Gradient: 20–70 % B za 2 min, průtok 0,4 mL/min, teplota 40 °C, injekce 2,5 µL
• Detekce: Thermo Scientific TSQ Vantage s HESI zdrojem, polarita + pro losartan, – pro HCTZ, furosemid jako interní standard

Hlavní výsledky a diskuse

Lineární rozsahy pro oba analyty pokrývaly koncentrace 0,5–500 ng/mL s koeficientem determinace r2 ≥ 0,995. Precision (RSD) byla < 6,1 % pro HCTZ i losartan na úrovni nízkého a vysokého QC. Obnovení signálu dosáhlo 86,4 % pro HCTZ a 65,8 % pro losartan. Pro HCTZ nebylo zaznamenáno přenosu mezi injekcemi, pro losartan byl použit dvakrát blank pro eliminaci nízkého carryover.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda kombinuje vysokou reprodukovatelnost, čistotu extraktů, sníženou spotřebu rozpouštědel a vzorku a krátký čas analýzy. Robustní SPE materiál SOLA CX šetří náklady a zjednodušuje přípravu vzorků, zatímco Accucore aQ kolona umožňuje rychlé chromatografické rozlišení polarních léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření těchto technologií do vysokoprůtokových automatizovaných sítí, miniaturizace kartridží a aplikace na širší spektrum polarních farmak a jejich metabolitů. Integrace s on-line SPE a multidimenzionálními chromatografiemi posílí citlivost a selektivitu.

Závěr

Kartridže SOLA CX ve spojení s kolónou Accucore aQ poskytují rychlou, citlivou a reprodukovatelnou metodu pro stanovení HCTZ a losartanu v lidské plazmě. Metoda je vhodná pro biofarmaceutický výzkum, klinické studie i rutinní QA/QC laboratoře.

Reference

• Jones J., Phipps K. LC-MS/MS Method for the Determination of HCTZ and Losartan from Human Plasma Using SOLA CX. Thermo Fisher Scientific Application Note ANCCSSOLAHZ&LN, 2011.