Comparison of Biotage® Extrahera™ vs. Manual Sample Processing Using a Vacuum Manifold - Extraction of 25-OH Vitamin D from Plasma

Význam tématu

Důsledné stanovení 25-OH vitamínu D v plazmě je zásadní pro posouzení stavu vitamínu D u pacientů a v klinicko-diagnostických laboratořích. Automatizace extrakčního kroku zvyšuje reprodukovatelnost, snižuje pracovní zatížení a zlepšuje kvalitu dat.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo porovnat automatizovanou přípravu vzorků na systému Biotage Extrahera s manuální podporovanou kapalinnou extrakcí (SLE+) pomocí vakua. Studie hodnotila výtěžnost, přesnost (% RSD) a lineární chování pro stanovení 25-OH D2 a D3.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek: poolovaná odstripovaná plazma obohacená o 25-OH D2, D3 (30 ng/mL) a interní standard D3-d6 (30 ng/mL). 200 µL vzorku bylo načteno na 400 µL SLE+ destičky ISOLUTE (820-0400-P01). Po absorpci a 5minutové inkubaci byly eluovány 2×750 µL heptanu pod gravitačním točením a tlakem/vakuem. Vzorky byly vysušeny v TurboVap 96 (37 °C) či SPE Dry (40 °C) a rekonstituovány v 100 µL 30:70 (v/v) voda/methanol.

Použitá instrumentace

• Biotage Extrahera™
• Vakuový manifold pro manuální extrakci
• TurboVap 96, SPE Dry
• Waters Acquity UHPLC s kolonkou Restek Pinnacle DB BiPhenyl 50×2,1 mm, 1,9 µm
• Waters Quattro Premier XE (MRM podmínky: D2 395,5→119,2; D3 383,5→107,2; D3-d6 389,6→263,5)

Hlavní výsledky a diskuse

Automatizovaná extrakce vykázala vyšší průměrné plošné signály u všech analyzovaných sloučenin: 25-OH D2 (+7,6 %), 25-OH D3-d6 (+4,1 %) a 25-OH D3 (+5,1 %). Největší zlepšení přesnosti bylo zaznamenáno pro 25-OH D3 (% RSD pokles z 6,7 % na 5,9 %, tedy o 11,8 %). Vzorky séra ukázaly srovnatelné výtěžnosti mezi oběma metodami (97–100 %). Kalibrační křivky v PBS-BSA i u komerčních kalibrátorů vykázaly výbornou linearitu (r²>0,99).

Přínosy a praktické využití metody

Automatizace odstraňuje lidský faktor, zajišťuje jednotnou kvalitu vzorků a umožňuje vysokou propustnost (96 vzorků na dávku). Zvýšená citlivost a nižší variabilita jsou výhodou pro klinické i průmyslové laboratoře orientované na QA/QC.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace s plně automatizovanými platformami pro další typy biomarkerů
• Rozšíření SLE+ aplikace pro multikomponentní analýzy
• Miniaturizace a využití zelených rozpouštědel
• Implementace umělé inteligence pro optimalizaci přípravy vzorků

Závěr

Biotage Extrahera v kombinaci s destičkami ISOLUTE SLE+ poskytuje rychlou, reprodukovatelnou a vysoce výtěžnou extrakci 25-OH vitamínu D z plazmy. Metoda zlepšuje citlivost, přesnost a efektivitu oproti tradiční manuální přípravě.

Reference

• Biotage. Technical Note PPS366: Extraction of 25-OH Vitamin D from Plasma Using ISOLUTE SLE+. 2014.