Comparison of Biotage Extrahera vs. Manual Sample Processing Using a Vacuum Manifold - Extraction of NSAIDs from Plasma

Význam tématu

Monitoring NSAIDs v biologických matricích je zásadní pro farmakokinetické studie, bezpečnostní kontrolu léčiv a farmaceutický vývoj. Podpovrchová kapalinná extrakce (SLE) zvyšuje selektivitu a čistotu extraktů, minimalizuje zatížení analytického systému a umožňuje vysokou propustnost vzorků.

Cíle a přehled studie

Cílem této studie bylo porovnat automatizovaný systém Biotage Extrahera s manuálním vakuovým manifoldem při extrakci tří NSAIDs (Sulindac, Ketoprofen, Indomethacin) z fortifikované lidské plasmy (25 ng/mL každého analytu) pomocí 96-jamkových SLE+ destiček. Extrakty byly následně analyzovány LC-MS/MS za účelem posouzení výtěžnosti a přesnosti metody.

Použitá metodika

• Příprava vzorku: Stržená poolovaná plasma byla 1:1 ředěna 1% kyselinou mravenčí (cílové pH 3,2) a fortifikována analytmi na 25 ng/mL.
• Plnění destiček: 400 µL předúpraveného vzorku bylo aplikováno na ISOLUTE SLE+ destičky (400 µL kapsle).
• Vsušení a eluce: Po 5min absorpci byly analyty eluovány 2×0,9 mL MTBE pod gravitací, následně doplněno pozitivním tlakem (Extrahera) nebo vakuem (manuální metoda).
• Koncentrace: Extrakty byly vysušeny při 37 °C v TurboVap 96 a rekonstituovány do 200 µL roztoku voda/methanol (60:40), poté promíchány na orbitalním shakeru.

Použitá instrumentace

• Kapalinová chromatografie: Waters Alliance 2795, kolona ACE Excel 2 C18-AR (50×2,1 mm), mobilní fáze 50:50 0,1% kyselina mravenčí/acetonitril, průtok 0,25 mL/min, injekční objem 25 µL.
• Hmotnostní spektrometrie: Waters Quattro Ultima Pt, režim MRM, využitím specifických přechodů pro Indomethacin, Sulindac a Ketoprofen.

Hlavní výsledky a diskuse

• Srovnání průměrných ploch píků ukázalo vyšší výtěžnost při použití Extrahera: Sulindac +7,8 %, Indomethacin +23,0 % oproti manuální metodě.
• Relativní směrodatné odchylky (% RSD) byly významně nižší u automatizované extrakce (Sulindac 4,01 % vs. 6,43 %, Indomethacin 5,46 % vs. 8,56 %), což představuje zlepšení o více než 35 %.
• Automatizace minimalizuje variabilitu lidského faktoru a zajišťuje konzistentní a reprodukovatelné výsledky.

Přínosy a praktické využití metody

• Vyšší přesnost a reprodukovatelnost analýzy NSAIDs v plazmě.
• Rychlejší zpracování velkého počtu vzorků v režimu 96-jamkové destičky.
• Snížení manuální práce a potenciálu kontaminace.
• Vhodné pro farmaceutické laboratoře, bioekvivalenční studie a klinické analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace automatizovaných extrakcí do komplexních pracovních postupů HTS (high-throughput screening).
• Rozšíření aplikace na širší spektrum biologických matric a farmakologických sloučenin.
• Další miniaturizace a optimalizace spotřeby rozpouštědel.
• Potenciál pro online spojení s LC-MS systémy pro real-time monitoring.

Závěr

Automatizované zpracování vzorků pomocí Biotage Extrahera a SLE+ metody prokázalo lepší výtěžnost a nižší variabilitu než tradiční manuální extrakce. Tento postup nabízí spolehlivou platformu pro rychlou a reprodukovatelnou analýzu NSAIDs v plazmě.

Reference

• Biotage. Technical Note PPS361, 2014.