Extraction of Catecholamines and Metanephrines from Human Plasma using EVOLUTE® EXPRESS WCX Prior to UHPLC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Extrahování katecholaminů a metanefrinů z lidské plazmy je klíčové pro diagnostiku endokrinních poruch jako feochromocytom a hypertenze. Cílená a reprodukovatelná příprava vzorku s vysokým výtěžkem a nízkými matricovými interferencemi podporuje přesnost UHPLC-MS/MS analýzy.

Cíle a přehled studie

Tato studie popisuje rychlou a robustní extrakci šesti analytů (norepinefrin, epinefrin, dopamin, normetanefrin, metanefrin, 3-methoxytyramin) z lidské plazmy pomocí sorbentu EVOLUTE EXPRESS WCX v 96dobrých panelech, následovanou UHPLC-MS/MS detekcí. Významně se zaměřuje na vliv různých antikoagulancií a na dosažení LOQ v klinicky relevantních koncentracích.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: plazma centrifugována při 6000×g, přidání deuterovaných interních standardů, ředění v 10 mM citrátovém pufru pH 7, SPE WCX (30 mg, 96dobrá deska) s kondicí, vzorkování, dvojitou vodní a organickou mycí sekvencí, vysušení a eluace do 2 mL kolekční desky.
• Evaporace a rekonsituce: vysušení eluátu a rekonstituce ve vodě/methanolu (95:5) s formic acid (0,1 %) pro minimalizaci matricových efektů.
• UHPLC: Shimadzu Nexera, kolona Avantor ACE Excel 1.7 C18-PFP (100×3,0 mm) s guard kartridží RESTEK Raptor ARC-18 2.7 µm; mobilní fáze A: 2 mM ammonium formate + 0.05 % formic acid ve vodě; B: 0.5 mM ammonium fluoride v methanolu; gradientní eluce, 0.5 mL/min, Tkol=30 °C, Toot=10 °C, inj. objem 10 µL.
• MS/MS: AB SCIEX Triple Quad 5500, pozitivní ESI, TurboIonSpray; MRM metodika s optimalizovanými přechody, desolvací a plyny pro dosažení vysoké citlivosti.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje extrakčních výtěžků 60–105 % s RSD <7 % napříč antikoagulanty (Li heparin, Na heparin, Na2EDTA, K3EDTA, citrát). Kalibrační křivky jsou lineární od 10 do 500 pg/mL (r2 > 0.995) s LOQ mezi 0.8 a 20 pg/mL, odpovídající klinickým referencím. Matrice faktory jsou 0.8–1.1, signal faktory blízké jedné, což svědčí o minimálních matricových interferencích. Profil phospholipidů ukazuje výrazné potlačení jejich průniku do eluátu.

Přínosy a praktické využití metody

Tento postup nabízí vysokou robustnost v klinických laboratořích, s kompatibilitou běžných antikoagulantů a snadnou integrací do vysoce výkonných automatizovaných platforem. Metoda eliminuje potřebu derivatizace a zkracuje dobu analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další optimalizace může zahrnovat miniaturizaci SPE kroků, přímou injekci eluátu s dynamickou změnou gradientu pro zkrácení doby analýzy a rozšíření na podobné polarické metabolity. Vývoj nových sorbentů s vyšší selektivitou může dále snížit matricové efekty.

Závěr

Popisovaný postup splňuje požadavky klinické analýzy katecholaminů a metanefrinů s vysokou přesností, citlivostí a reprodukovatelností. Vysoké recovery, nízké LOQ a minimální matricové interference potvrzují vhodnost metody pro rutinní nasazení.

Reference

• Biotage, 2016. Simultaneous Extraction of Catecholamines and Metanephrines from Plasma Prior to Analysis using LC-MS/MS. Poster P152, MSACL-EU 2016, Salzburg, Austria.