Extraction of Patulin From Clear Apple Juice Using ISOLUTE® Myco prior to LC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Patulin je mykotoxin produkovaný plísněmi rodu Aspergillus a Penicillium na hnilobných jablkách. Jeho sledování a kvantifikace jsou nezbytné pro zajištění bezpečnosti ovocných produktů a dodržení globálně stanovených limitů (10 μg kg-1 pro jablečný džus).

Cíle a přehled studie / článku

Cílem práce bylo vyvinout a ověřit jednoduchý a účinný postup pevné fáze SPE s použitím kolonek ISOLUTE® Myco pro extrakci patulinu z čirého jablečného džusu před kvantitativní analýzou LC-MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorku byl jablečný džus naředěn 1 : 1 v 10 mM roztoku octanu amonného pH 5 a upraven hydroxidem amonným. SPE s kolonkami ISOLUTE Myco (60 mg/3 mL) zahrnovalo kondicionaci acetonitrilem, equilibraci pufrem, nanesení vzorku, dvojité promytí (pufr + toluen), vysušení a eluční krok acetonitrilem. Eluát byl koncentrován jemným proudem vzduchu nebo dusíku a rekonstituován ve vodě před analýzou. Chromatografie probíhala na HPLC systému Waters Alliance 2795 se sloupcem Kinetex phenyl-hexyl, gradientní eluce vodou a acetonitrilem a detekce na Waters Ultima Platinum QQQ v režimu ESI negative mode s metodou MRM.

Použitá instrumentace

• HPLC: Waters Alliance 2795
• Kolona: Kinetex phenyl-hexyl 50 × 2,1 mm, 2,6 μm
• MS: Waters Ultima Platinum QQQ (ESI-, MRM)
• Positive pressure manifold: Biotage PRESSURE+ 48
• Odpařovač: TurboVap LV

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla průměrné recoverie patulinu 101 % (n=7) s RSD <10 % a LOQ 10 μg kg-1. Extrakce spolehlivě odstranila interferenční hydroxymethylfurfural (HMF), což vedlo k čistým chromatogramům a přesné kvantifikaci. Kalibrační křivka v rozmezí 2–200 ng mL-1 vykázala vynikající linearitu (r2 > 0,99).

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká selektivita a účinnost čištění vzorků
• Dodržení regulačních limitů patulinu
• Nasazení v QA/QC laboratořích a pro rutinní analýzy
• Rychlý postup s nízkou náročností na obsluhu

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace SPE pro vyšší propustnost
• Rozšíření metodiky na více tříd mykotoxinů
• Využití zelených rozpouštědel a mikrominiaturizace
• Integrace s vysokorozlišujícími MS technikami

Závěr

Navržená SPE metoda s ISOLUTE Myco poskytuje spolehlivou a reprodukovatelnou extrakci patulinu z čirého jablečného džusu pro následnou LC-MS/MS analýzu. Vysoká návratnost, nízká variabilita a dostatečná citlivost zajišťují splnění regulačních požadavků.

Reference

• Biotage Application Note AN781, 2013