LC-MS/MS Method for the Determination of Enalapril and Enalaprilat from Human Plasma Using SOLA

Význam tématu

Monitoring léčiv a jejich aktivních metabolit v lidské plazmě je klíčový pro klinické studie, terapeutické monitorování a farmakokinetické hodnocení. Metoda LC–MS/MS je standardem pro vysoce citlivou a selektivní kvantifikaci látek v komplexních biologických matricích. Zavedení nové generace jednotek SPE, jako jsou SOLA kartridže, významně zvyšuje efektivitu přípravy vzorků, snižuje spotřebu rozpouštědel a zajišťuje spolehlivé výsledky.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout rychlou a reprodukovatelnou LC–MS/MS metodu pro kvantifikaci enalaprilu a jeho aktivního metabolitu enalaprilatu v lidské plazmě. Klíčové body:

• Využití Thermo Scientific SOLA SPE kartridží pro efektivní extrakci.
• Chromatografická separace na kolóně Hypersil GOLD (1.9 µm, 50×2.1 mm) s cyklem 1 minutu.
• Lineární rozsah detekce 1–100 ng/mL s r2 vyšší než 0.997.

Použitá metodika a instrumentace

Sample pretreatment pomocí SOLA SPE:

• Kondicionování kartridže: 1 mL metanol, 1 mL voda.
• Aplikace 200 µL plazmy se standardy a interním standardem (benazepril).
• Proplach: 200 µL 0.1 % kyseliny mravenčí ve vodě.
• Eluce: 2×200 µL 2 % amoniaku v methanolu.
• Sušení a rekonstituce v 200 µL 90:10 (v/v) vodě/methanolu.

Chromatografie a MS/MS detekce:

• UHPLC: Thermo Scientific Accela 600, kolona Hypersil GOLD 1.9 µm (50×2.1 mm), teplota 70 °C, průtok 0.6 mL/min.
• Mobile phase A: voda + 0.1 % kyseliny mravenčí; B: acetonitril + 0.1 % kyseliny mravenčí; gradient 10–100 % B za 1 minutu.
• Injekce 2.5 µL, mytí injektoru vodou/acetonitrilem (80:20) a čistým organickým rozpouštědlem.
• MS – TSQ Vantage, HESI v pozitivním módu: spray 3000 V, vaporizer 317 °C, capilární 370 °C, srážecí tlak 1.5 mTorr, SRM přechody (např. enalapril 377→234 m/z, CE 16 eV).

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity a citlivost:

• Enalapril: 1–100 ng/mL, r2 0.9986.
• Enalaprilat: 1–100 ng/mL, r2 0.9974.

Preciznost a přesnost:

• QC vzorky na 50 ng/mL, CV < 6.6 %.
• Standardy 1–100 ng/mL s odchylkami do ±18 %.

Recovery a carry-over:

• Recoveries: enalapril 81 %, enalaprilat 85 %, benazepril 87 %.
• Carry-over < 20 % počáteční odezvy, v praxi zanedbatelné.

Chromatogramy ukázaly ostré, symetrické píky při 1 minutě, vhodné pro vysokou průchodnost vzorků.

Přínosy a praktické využití metody

Díky použití SOLA SPE kartridží a Hypersil GOLD kolony je příprava vzorků zjednodušena a urychlena, s výraznou úsporou rozpouštědel a sušení. Metoda nabízí:

• Vysokou reprodukovatelnost a objemovou efektivitu.
• Minimální matrikové interference a čisté extrakty.
• Krátký běh (1 min) pro vysokou kapacitu analýzy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozšíření SOLA SPE do automatizovaných systémů pro zvýšení průchodnosti a standardizace v klinických laboratořích. Metoda může být adaptována na dalších ACE inhibitorů a farmakokinetických studií. Vývoj pokročilých sorbentů a miniaturizovaných SPE formátů slibuje další úspory vzorku a rozpouštědel.

Závěr

Metoda LC–MS/MS kombinující SOLA SPE a Hypersil GOLD poskytuje rychlou, citlivou a spolehlivou kvantifikaci enalaprilu a enalaprilatu v lidské plazmě. Dosahuje vynikajících parametrů linearity, přesnosti, recoveries a nízkého carry-over, což ji předurčuje pro vysokoobjemové bioanalytické aplikace.

Reference

Application Note ANCCSSOLAEPRL: LC–MS/MS Method for the Determination of Enalapril and Enalaprilat from Human Plasma Using SOLA, Joanne Jones, Kimberley Phipps, Ken Meadows, Thermo Fisher Scientific, 2011