Analysis of Estradiol and Estrone Using a Core Enhanced Technology Accucore HPLC Column

Význam tématu

Analýza estrogenů, konkrétně estradiolu a estronu, je klíčová v klinické diagnostice reprodukčních funkcí, monitorování léčby neplodnosti či hormonální terapie a v onkologii. Rychlé a přesné stanovení těchto steroidů umožňuje zkrátit dobu vyšetření, zvýšit propustnost vzorků a snížit spotřebu organických rozpouštědel.

Cíle a přehled studie / článku

Tato aplikační zpráva demonstruje využití termostabilní HPLC kolony Accucore RP-MS (Core Enhanced Technology, 2,6 µm částice) pro separaci a rychlou analýzu estradiolu a estronu. Cílem je dosáhnout rozlišení obou sloučenin za méně než jednu minutu při vyšší účinnosti a opakovatelnosti.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorek: Pracovní standard obsahující 50 µg/mL estradiolu a 50 µg/mL estronu v mobilní fázi.
• Chromatografická kolona: Thermo Scientific Accucore RP-MS, 2,6 µm, 100 × 2,1 mm.
• Kapalinový chromatograf: Thermo Scientific Accela.
• Podmínky separace:
  • Teplota kolony: 40 °C
  • Objem injekce: 1 µL
  • Průtok: 0,6 mL/min
  • Detekce: UV při 220 nm
  • Mobilní fáze: voda/acetonitril (1:1, v/v)
• Core Enhanced Technology: Pevné jádro s porézní vrstvou zajišťuje vyšší účinnost píků a nižší zpětný tlak než u sub-2 µm materiálů.
• Spotřební materiál: HPLC voda a acetonitril (HPLC grade), MS certifikované vialky s PTFE/ silikonovým uzávěrem.

Hlavní výsledky a diskuse

Separační výkon Accucore RP-MS umožnil eluci estradiolu a estronu za méně než 1 minutu. Reprodukovatelnost byla ověřena šesti opakovanými injekcemi:

• Faktor asymetrie: estradiol 1,56, estron 1,43
• %RSD retenčního času: 0,08 % u estradiolu, 0,09 % u estronu
• %RSD plochy píků: 0,68 % u estradiolu, 0,84 % u estronu

Chromatogram ukázal rychlé a ostré píky s minimálním vyosením, což potvrzuje snížené sekundární interakce díky optimalizovanému alkylovému řetězci na povrchu částic.

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zkrácení doby analýzy a zvýšení propustnosti laboratoře.
• Nižší spotřeba mobilní fáze s pozitivním dopadem na náklady a ekologii.
• Vysoká opakovatelnost a robustnost vhodná pro rutinní klinická a QA/QC měření estrogenů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na další steroidy a malé biomolekuly s podobnými chemickými vlastnostmi.
• Integrace s hmotnostní spektrometrií pro zvýšení selektivity a citlivosti analýzy.
• Automatizace přípravy vzorku a vysokopropustná metabolomická vyšetření.

Závěr

Accucore RP-MS kolona s Core Enhanced Technology nabízí rychlou, vysoce účinnou a reprodukovatelnou separaci estradiolu a estronu pod 1 minutu. Metoda je ideální pro klinické a průmyslové laboratoře vyžadující vysokou propustnost a spolehlivost.

Reference

• Gartland J. Application Note ANCCSCETESTRO: Analysis of Estradiol and Estrone Using a Core Enhanced Technology Accucore HPLC Column. Thermo Fisher Scientific, Runcorn, Cheshire, UK, 2011.