Determination of Gestodene in Human Plasma by SLE-LC-MS/MS Using a Solid Core HPLC Column

Význam tématu

Gestodene se široce používá jako progestin v perorálních kontraceptivních přípravcích a jeho spolehlivé stanovení v lidské plazmě je klíčové pro farmakokinetické studie, bioekvivalenční testy a monitorování bezpečnosti léčiv. Metody s vysokou citlivostí a selektivitou minimalizují vliv matricových interferencí a zajišťují splnění regulatorních požadavků.

Cíle a přehled studie / článku

Studie měla za cíl vyvinout a validovat rychlou, citlivou a reprodukovatelnou metodu stanovení gestodenu v lidské plazmě pomocí pevné podpory kapalné extrakce (SLE) a LC-MS/MS. Jako interní standard byl použit deuterovaný gestoden (d6). Separace probíhala na Accucore C18 kolóně v gradientním režimu a detekce na triple kvadrupólu s HESI zdrojem v SRM módu.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava standardů: osm kalibračních úrovní (0,05–5 ng/mL), kontrolní vzorky pro přesnost.
• Extrakce vzorků: 300 μL fortifikované plazmy + interní standard + 0,1% kyselina mravenčí, adsorpce na HyperSep SLE, eluce 2×1000 μL MTBE, odpaření a rekonstituce v metanol/voda (80:20 v/v).
• Chromatografie: Accucore C18 2,6 μm, 50×2,1 mm, gradient A (voda/0,1% kyselina mravenčí) a B (methanol/0,1% kyselina mravenčí), průtok 0,4 mL/min, teplota 40 °C, doba běhu 5 min, injekční objem 10 μL.
• Hmotová spektrometrie: TSQ Vantage, HESI-II zdroj, pozitivní ionizace, SRM přechody m/z 311,2→109,1 (gestoden) a 317,2→114,1 (d6-gestoden), Q1/Q3 šířka 1,2 Da, kolizní tlak 1,5 mTorr.
• Zpracování dat: Thermo Scientific LCQuan v.2.6, integrační algoritmus ICIS.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific HyperSep SLE 500 mg/3 mL
• Thermo Scientific Accela 1250 pumpa a Accela Open autosampler
• Thermo Scientific Accucore C18 2,6 μm, 50×2,1 mm
• Thermo Scientific TSQ Vantage triple kvadrupólový hmotový spektrometr
• Thermo Scientific FinnPipette pipety a Micro+ Vial 300 μL

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární odpověď v rozsahu 0,05–5 ng/mL s r2=0,999 a relativními chybami do ±5%. Precizita pro 2,5 ng/mL (n=6) dosáhla CV 1,86 %. Retenční čas o hodnotě 2,84 min poskytl ostré píky a SRM chromatogramy prokázaly vysokou selektivitu a signál s šumem až 920 při 2,5 ng/mL. Metoda efektivně eliminuje matricové interferencí, zejména fosfolipidů.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlý a vysoce propustný analytický postup
• Snížená spotřeba organických rozpouštědel díky SLE
• Vhodnost pro bioekvivalenční a farmakokinetické studie
• Možnost automatizace a snížení manuálních chyb při přípravě vzorků

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší využití pevné podpory kapalné extrakce v kombinaci s UHPLC pro zkrácení doby analýz. Další miniaturizace a automatizace extrakčních sorbentů podpoří zvýšení efektivity a citlivosti. Metodu je možné adaptovat pro současné stanovení více steroidních hormonů v terapeutickém monitorování a toxikologii.

Závěr

Vyvinutá SLE-LC-MS/MS metoda pro stanovení gestodenu v lidské plazmě je rychlá, citlivá a reprodukovatelná s vynikající linearitou i precizností. Díky minimalizaci matricových interferencí a možnosti automatizace je vhodná pro rutinní bioanalytické aplikace.

Reference

• Junior EA Duarte LF Pirasol Vanunci ML Teixeira ML Bioequivalence of Two Oral Contraceptive Drugs Containing Ethinylestradiol and Gestodene in Healthy Female Volunteers J Bioequiv Availab 2010 2 125-130 doi 10.4172/jbb.1000044
• FDA Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation 2012