Quantification of amino acids and acylcarnitines in dried blood spots by FIA-MS/MS
Aplikace | 2020 | Thermo Fisher ScientificInstrumentace
Poruchy dědičného metabolismu se často diagnostikují podle profilu aminokyselin a acylkarnitinů v suchých kapkách krve (DBS). Rychlá a spolehlivá analýza těchto metabolitů je zásadní pro screening novorozenců i výzkum vrozených metabolických vad.
Cílem studie bylo zavést jednoduchou a výkonnou metodu FIA-MS/MS pro současné stanovení 11 aminokyselin a 13 acylkarnitinů v DBS. Využití flow injection analýzy zkracuje dobu měření a minimalizuje potřebu chromatografického dělení.
Ke vzorkům DBS (3,2 mm punch) bylo přidáno 100 µl extrakčního činidla obsahujícího izotopově značené interní standardy (NeoBase MSMS Complete Kit, PerkinElmer). Extrakce probíhala při 45 °C po dobu 45 min při 700 rpm. Analýza byla provedena na systému Vanquish Flex Binary UHPLC (thermostatika na 45 °C, objem injekce 10 µl) spojeném s TSQ Fortis triple-stage kvadrupólem s HESI zdrojem v pozitivním režimu. Metoda používala režim SRM s optimalizovanými kolizními energiemi a hodnotami tubové čočky pro každou analyzovanou látku.
Metoda vykázala vnitro-i mezisériovou přesnost (CV) nižší než 10,3 % pro všechny sledované látky. Bias stanovených koncentrací oproti nominálním hodnotám se pohyboval mezi –8,6 % a +8,8 %, což je v souladu s požadavky klinických výzkumných laboratoří. Pro arginin a ornitin byly použity surrogátní kontrolní vzorky, díky interním standardům však bylo možné jejich kvantifikaci v autentických vzorcích.
Metoda je perspektivní pro další rozšíření panelu sledovaných látek (např. acylglycinů či organických kyselin). Očekává se integrace s plně automatizovanými systémy přípravy vzorků a využití pokročilých algoritmů strojového učení pro rychlejší interpretaci výsledků. Další vylepšení může přinést nasazení nových ionizačních zdrojů a miniaturizovaných MS systémů pro POC (point-of-care) aplikace.
Zavedená FIA-MS/MS metoda na platformě Vanquish Flex UHPLC – TSQ Fortis splňuje požadavky na přesnost, citlivost a výkonnost potřebné v klinických i výzkumných laboratořích zabývajících se screeningem metabolických poruch.
LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
ZaměřeníKlinická analýza
VýrobceThermo Fisher Scientific
Souhrn
Význam tématu
Poruchy dědičného metabolismu se často diagnostikují podle profilu aminokyselin a acylkarnitinů v suchých kapkách krve (DBS). Rychlá a spolehlivá analýza těchto metabolitů je zásadní pro screening novorozenců i výzkum vrozených metabolických vad.
Cíle a přehled studie
Cílem studie bylo zavést jednoduchou a výkonnou metodu FIA-MS/MS pro současné stanovení 11 aminokyselin a 13 acylkarnitinů v DBS. Využití flow injection analýzy zkracuje dobu měření a minimalizuje potřebu chromatografického dělení.
Použitá metodika a instrumentace
Ke vzorkům DBS (3,2 mm punch) bylo přidáno 100 µl extrakčního činidla obsahujícího izotopově značené interní standardy (NeoBase MSMS Complete Kit, PerkinElmer). Extrakce probíhala při 45 °C po dobu 45 min při 700 rpm. Analýza byla provedena na systému Vanquish Flex Binary UHPLC (thermostatika na 45 °C, objem injekce 10 µl) spojeném s TSQ Fortis triple-stage kvadrupólem s HESI zdrojem v pozitivním režimu. Metoda používala režim SRM s optimalizovanými kolizními energiemi a hodnotami tubové čočky pro každou analyzovanou látku.
Hlavní výsledky a diskuse
Metoda vykázala vnitro-i mezisériovou přesnost (CV) nižší než 10,3 % pro všechny sledované látky. Bias stanovených koncentrací oproti nominálním hodnotám se pohyboval mezi –8,6 % a +8,8 %, což je v souladu s požadavky klinických výzkumných laboratoří. Pro arginin a ornitin byly použity surrogátní kontrolní vzorky, díky interním standardům však bylo možné jejich kvantifikaci v autentických vzorcích.
Přínosy a praktické využití metody
- Krátký doba analýzy: celkový běh 1,5 minuty na vzorek.
- Jednoduchá příprava vzorku: žádná derivatizace, minimální manipulace.
- Vysoká selektivita a citlivost díky SRM režimu.
- Vhodná pro screening novorozenců a výzkum vrozených metabolických vad.
Budoucí trendy a možnosti využití
Metoda je perspektivní pro další rozšíření panelu sledovaných látek (např. acylglycinů či organických kyselin). Očekává se integrace s plně automatizovanými systémy přípravy vzorků a využití pokročilých algoritmů strojového učení pro rychlejší interpretaci výsledků. Další vylepšení může přinést nasazení nových ionizačních zdrojů a miniaturizovaných MS systémů pro POC (point-of-care) aplikace.
Závěr
Zavedená FIA-MS/MS metoda na platformě Vanquish Flex UHPLC – TSQ Fortis splňuje požadavky na přesnost, citlivost a výkonnost potřebné v klinických i výzkumných laboratořích zabývajících se screeningem metabolických poruch.
Reference
- Barcenas M. Quantification of amino acids and acylcarnitines in dried blood spots by FIA-MS/MS. Thermo Fisher Scientific Technical Note 73760; 2020.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
Podobná PDF
Determination of inborn errors of metabolism
2020|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 73759 Determination of inborn errors of metabolism Quantification of amino acids and acylcarnitines in dried blood spots by FIA-MS/MS for clinical research Author: Mariana Barcenas, Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, France Keywords: Amino acids, acylcarnitines, dried blood spots,…
Klíčová slova
normal, normalacylcarnitines, acylcarnitinesµmol, µmolcitrulline, citrullinephenylalanine, phenylalanineglycine, glycineornithine, ornithinevaline, valineproline, prolineacid, acidaspartic, asparticglutamic, glutamicalanine, alaninearginine, argininetyrosine
Determination of inborn errors of metabolism
2020|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 73759 Determination of inborn errors of metabolism Quantification of amino acids and acylcarnitines in dried blood spots by FIA-MS/MS for clinical research Author: Mariana Barcenas, Thermo Fisher Scientific, Les Ulis, France Keywords: Amino acids, acylcarnitines, dried blood spots,…
Klíčová slova
normal, normalacylcarnitines, acylcarnitinesµmol, µmolphenylalanine, phenylalaninecitrulline, citrullineglycine, glycineornithine, ornithinevaline, valineproline, prolineacid, acidaspartic, asparticglutamic, glutamicalanine, alaninearginine, argininetyrosine
Simultaneous Analysis of Amino Acids, Acylcarnitines, and Succinylacetone in Dried Blood Spots for Research Using Nonderivatized and Derivatized Methods
2015|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
Xiaolei Xie and Marta Kozak, Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA Key Words Amino acids, acylcarnitines, succinylacetone, dried blood spot, nonderivatized, derivatized, TSQ Endura Goal To develop flow injection analysis-tandem mass spectrometry (FIA-MS/MS) research methods for simultaneous detection and quantification…
Klíčová slova
suac, suacglycine, glycinecitrulline, citrullineornithine, ornithineacylcarnitines, acylcarnitinesphenylalanine, phenylalaninetyrosine, tyrosineintermediate, intermediatevaline, valineaspartic, asparticglutamic, glutamicalanine, alaninearginine, argininemethionine, methionineleucine
Simultaneous analysis of amino acids, acylcarnitines, and succinylacetone in dried blood spots for research using nonderivatized and derivatized methods
2020|Thermo Fisher Scientific|Aplikace
TECHNICAL NOTE 73398 Simultaneous analysis of amino acids, acylcarnitines, and succinylacetone in dried blood spots for research using nonderivatized and derivatized methods Authors: Xiaolei Xie and Marta Kozak Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA Keywords: Amino acids, acylcarnitines, succinylacetone, dried…
Klíčová slova
suac, suacµmol, µmolglycine, glycinecitrulline, citrullineornithine, ornithinesuccinylacetone, succinylacetoneacylcarnitines, acylcarnitinesnonderivatized, nonderivatizedintermediate, intermediatevaline, valinenonderivatization, nonderivatizationaspartic, asparticglutamic, glutamicalanine, alaninephenylalanine
