Impurity Profiling Using Orbitrap Exploris 120 Mass Spectrometer and Vanquish UHPLC Coupled with Compound Discoverer Software

Význam tématu

Profilování nečistot v malých molekulách je nezbytné pro vývoj léčiv a splnění regulačních požadavků. Detailní poznání jak známých, tak neznámých nečistot zajišťuje bezpečnost a účinnost konečného produktu.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo demonstrovat kombinaci vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie Orbitrap Exploris 120, ultra-vysokoúčinné kapalinové chromatografie Vanquish UHPLC a softwaru Compound Discoverer 3.2 pro komplexní charakterizaci nečistot API, na modelovém přípravku Mykofenolát mofetil.

Použitá metodika

• Příprava vzorku: roztok API ve vodě/ACN (25 % ACN), koncentrace 0,25 mg/ml.
• UHPLC separace: kolona Hypersil GOLD C18 (2,1×100 mm, 1,9 µm), gradient 10–95 % ACN s 0,1 % kyselinou mravenčí a 10 mM formiátu amonného, 0,4 ml/min, 50 °C.
• MS akvizice: Orbitrap Exploris 120 s ESI v pozitivním a negativním režimu, plný scan (m/z 125–1500) při rozlišení 60 000, následované DDA MS2 top-4 při rozlišení 15 000, rychlé přepínání polarity, interní kalibrace EASY-IC.
• Datové zpracování: Compound Discoverer 3.2 s uzlovým workflow, extrakce komponent, predikce sumárního vzorce, databázové vyhledávání, FISh scoring pro validaci struktur.

Použitá instrumentace

• Thermo Scientific Vanquish UHPLC (Binary Pump, Split Sampler FT, Column Compartment, DAD FG).
• Hypersil GOLD VANQUISH C18 kolona, 2,1×100 mm, 1,9 µm.
• Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 hmotnostní spektrometr s OptaMax NG iontovým zdrojem.
• Software Thermo Scientific Compound Discoverer 3.2.

Hlavní výsledky a diskuse

V jediném běhu s přepínáním polarity byl získán bohatý HRAM plný scan i DDA MS2 datový soubor s dobou cyklu cca 1 s. Metoda umožnila detekci a strukturální charakterizaci očekávaných i neočekávaných nečistot včetně stopových úrovní. Kombinace pozitivních i negativních fragmentů usnadnila určení lokalizace modifikací, potvrzené FISh coverage skóre. Jako příklad byla identifikována nečistota s přesnou formulí C23H31NO8, retencí 5,97 min a vysokou úrovní shody fragmentů.

Přínosy a praktické využití metody

Workflow přináší výrazné zrychlení a zvýšení citlivosti rutinního profilování nečistot, podporuje rozhodování v QA/QC laboratořích farmaceutického průmyslu a zvyšuje důvěryhodnost strukturálních návrhů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se integrace s umělou inteligencí a strojovým učením pro automatizovanou interpretaci fragmentačních dat, rozšíření na další třídy sloučenin, real-time monitoring procesů a plná automatizace datového workflow.

Závěr

Kombinace Vanquish UHPLC, Orbitrap Exploris 120 a Compound Discoverer 3.2 tvoří robustní platformu pro detailní, rychlé a spolehlivé profilování nečistot malých molekul v průmyslové i výzkumné praxi.

Reference

• Nejsou uvedeny.