Quantitative Analysis of Anthocyanins in Tea Leaves and Barley

Význam tématu

Anthokyany jsou přírodní flavonoidy s významnými antioxidačními vlastnostmi. Jejich kvantitativní stanovení v rostlinných vzorcích, jako jsou čajové lístky a ječmen, je zásadní pro hodnocení nutričních a funkčních vlastností potravin.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout jednoduchou a rychlou HPLC metodu pro současnou analýzu čtyř hlavních anthokyanových glykozidů bez nutnosti acidolytické hydrolýzy. Metoda byla ověřena na dvou odrůdách čajových listů (Yabukita, Sunrouge) a na odrůdě ječmene (Daishimochi).

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly extrahovány následujícím postupem:

1. Váha 1,0 g drceného vzorku a přidání 15 mL extrakčního roztoku (0,5 % TFA/40 % metanol/60 % voda).
2. Shaking 10 minut (250 rpm), odstředění 10 000×g po 5 minutách.
3. Odběr supernatantu do objemové baňky 25 mL, doobjemnění extrakčním roztokem a filtrace.

Analytické podmínky HPLC:

• Zařízení: Shimadzu Nexera X3
• Kolona: Shim-pack GIST HP C18 (150×4,6 mm, 3 μm)
• Mobilní fáze A: 2 % kyselina mravenčí ve vodě; B: 2 % kyselina mravenčí/acetonitril (1:1 v/v)
• Gradient: 15–30 % B v 15 min, následně do 100 % B a návrat na 15 % v 25 min
• Průtok: 1,0 mL/min, teplota kolony 40 °C, detekce při 520 nm, injekce 10 μL

Hlavní výsledky a diskuse

Během 25 min byly efektivně separovány čtyři anthokyaniny: delphinidin‐3‐galaktosid, delphinidin‐3‐glukosid, cyanidin‐3‐galaktosid a chrysanthemin‐3‐glukosid. Linearita v rozsahu 0,2–20 μg/mL pro všechny sloučeniny vykazovala koeficient R2 ≥ 0,999. Opakovatelnost (n=7) dále potvrdila nízké %RSD: v čaji <2,1 % a v ječmeni <4,8 %. Reálná obsahová analýza ukázala, že odrůda Sunrouge obsahuje až 0,1876 mg delphinidin‐3‐galaktosidu na 100 g sušiny, zatímco ječmen Daishimochi měl nejvyšší hodnotu 0,00865 mg/100 g u chrysanthemin‐3‐glukosidu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje:

• Analýzu anthokyaninů ve formě glykozidů bez hydrolýzy
• Použití standardních HPLC přístrojů
• Rychlé vyhodnocení funkčních složek v zemědělských a potravinářských vzorcích

Budoucí trendy a možnosti využití

Možnost rozšíření na další potravinové matrice a sloučeniny, integrace s hmotnostní spektrometrií pro strukturální potvrdění a automatizované systémy pro zvýšení průtoku analýz.

Závěr

Vyvinutá HPLC metoda na bázi Nexera X3 poskytuje spolehlivou, citlivou a rychlou analýzu čtyř anthokyaninů v potravinových vzorcích. Vysoká linearita, opakovatelnost a možnost použití existujících systémů ji předurčují pro rutinní QC i výzkumné aplikace.

Reference

1. Oki T., Analysis of anthocyanins in purple sweet potato, Food Functionality Evaluation Manual Vol.I, 2. vydání
2. Oki T., Analysis of anthocyanins in purple sweet potato, Food Functionality Evaluation Manual Vol.IV
3. Masada S. et al., An analysis of anthocyanins in Foods with Functional Claims containing bilberry extracts, JJFCS, 24(1), 32–38 (2017)