Fully automated forensic screening of dried bloodspots with MRM Spectrum Mode (MP 099)

Význam tématu

Rostoucí počet předepisovaných i nelegálních látek vyžaduje efektivní a rychlé screenovací metody v toxikologii. Suché krevní skvrny (DBS) nabízejí minimálně invazivní odběr, snadné skladování a přepravu, což usnadňuje hromadné testování v soudní toxikologii, dopingových kontrolách nebo postmortálních vyšetřeních.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo zavést plně automatizované vytažení látek ze suchých krevních skvrn spojené s LC–MS/MS analýzou a ověřit novou strategii MRM Spectrum Mode pro zvýšení jistoty identifikace více než 28 cílových drog a metabolitů.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda využívá systém DBS-MS 500 (CAMAG) v kombinaci s Nexera X2 UHPLC a tandemovou hmotnostní spektrometrií LCMS-8040/8060 (Shimadzu). Vše probíhá v režimu vícečetného monitorování reakcí (MRM) při pozitivní ionizaci ESI. Chromatografie se provádí na C18 sloupcích Shim-pack GIST a Kinetex s gradientem amonných solných roztoků a methanolem. Extrakce je plně automatizovaná v jednotce DBS-MS 500, včetně aplikace deuterovaných interních standardů na kartu.

Hlavní výsledky a diskuse

Srovnání klasického DDA sběru dat a MRM Spectrum Mode ukázalo u MRM výrazně vyšší podobnost se vzorovými spektry (SI ~98 vs 61) a kratší cyklus sběru dat (30 ms vs 95 ms). Kalibrační křivky pro 27 látek vykázaly R² >0,99 a relativní standardní odchylky pod 15 % (výjimky THCA-A, 6-MAM, diazepam do 25 %). Metoda prokázala vysokou robustnost, opakovatelnost a schopnost detekovat toxikologické a cut-off koncentrace.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlost: 5 minut na vzorek (rozšířeno na 20 min pro přesnou identifikaci 1200+ látek s forenzní databází).
• Zvýšená jistota výsledků díky pěti MRM přechodům na látku.
• Snížení falešně pozitivních i negativních nálezů.
• Plně automatizovaný workflow minimalizuje manuální zásahy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Implementace MRM Spectrum Mode do širších forenzních databází a aplikace na další biologické matrice. Vylepšení citlivosti pro kanabinoidní deriváty a využití high-resolution MS k rozšíření panelu detekovaných látek.

Závěr

Navržený plně automatizovaný protokol pro analýzu suchých krevních skvrn s využitím MRM Spectrum Mode je rychlý, přesný, robustní a přenositelný do rutinních laboratoří, což významně zlepšuje kapacitu a kvalitu forenzního screeningového testování.

Použitá instrumentace

• DBS-MS 500 (CAMAG, Švýcarsko)
• Nexera X2 UHPLC (Shimadzu, Japonsko)
• LCMS-8040/8060 (Shimadzu, Japonsko)
• C18 chromatografické kolony Shim-pack GIST a Kinetex
• Software LabSolutions Insight Screening