MassHunter Optimizer Software for Automated MRM Method Development Using the Agilent 6400 Series Triple Quadrupole Mass Spectrometers

Význam tématu

Triple-kvadruplexy v kombinaci s režimem MRM (Multiple Reaction Monitoring) nabízí vysokou selektivitu, citlivost a široký dynamický rozsah, což je klíčové při kvantifikaci stopových látek v biologických matricích (plazma, krev, moč). Automatizované optimalizační nástroje zvyšují efektivitu vývoje analytických metod a zkracují čas potřebný pro nastavení optimálních parametrů.

Cíle a přehled studie / článku

Článek popisuje funkcionalitu softwaru MassHunter Optimizer pro automatické stanovení konkrétních parametrů (fragmentační napětí, kolizní energie) na přístrojích Agilent 6400 Series Triple Quadrupole MS. Cílem je demonstrovat workflow a vyzdvihnout přínos automatizovaného postupu oproti manuální optimalizaci.

Metodika a použitá instrumentace

Workflow Optimalizátoru zahrnuje:

• Import seznamu cílových látek (názvy, hmotnostní vzorce) ručně nebo z Excelu
• Výběr prekurzorových iontů (nejintenzivnější, možnosti filtrování nabíječů a isobarických signálů)
• Výběr produktových iontů s vyloučením nespecifických fragmen­tů (nastavení dolní hranice m/z, vyloučení definovaných m/z)
• Volbu způsobu aplikace vzorku: manuální infuze, loop injekce, HPLC bez kolony, HPLC s kolonou (doporučeno)
• Optimalizaci fragmentačního napětí: hrubé vyhledání maxima signálu a volitelná jemná ladicí opatření
• Optimalizaci kolizní energie (CE): generování přehledu CE profilů, výběr nejlepšího nastavení dle intenzity signálu
• Export výsledných MRM podmínek do databáze nebo Excelu a import do MassHunter Acquisition

Instrumentace:

• Agilent 6400 Series Triple Quadrupole Mass Spectrometer
• LC systém s možností výměny kolony
• Software Agilent MassHunter Optimizer a Acquisition

Hlavní výsledky a diskuse

Automatizovaná optimalizace zajistila v přes 80 % případů ekvivalentní nebo lepší výsledky než ruční nastavení. Workflow s HPLC kolonou přineslo nejvyšší robustnost a reprodukovatelnost optimalizace, přestože běh jedné analýzy zabere více času. Systém dokáže úspěšně optimalizovat téměř 100 % zadaných analyzovaných látek.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizované nastavení MRM metod:

• Šetří čas a lidské zdroje při vývoji a validaci metod
• Zvyšuje reprodukovatelnost a konzistenci výsledků
• Umožňuje rychlé nasazení nových analytických metod v laboratořích pro výzkum i QA/QC

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další integrace strojového učení pro predikci optimálních parametrů přímo z chemické struktury, rozšíření databází fragmentačních profilů a podpora pokročilých workflows, např. multiplexních MRM analýz. Další vývoj povede k více autonomním laboratořím a zkrácení doby implementace nových metod.

Závěr

MassHunter Optimizer poskytuje plně automatizovaný, robustní a spolehlivý nástroj pro optimalizaci MRM metod na triple-kvadruplech Agilent 6400. Díky podpoře HPLC s kolonou dosahuje vynikající úspěšnosti a stabilních výsledků, což významně urychluje analytický postup a zvyšuje kvalitu dat.

Reference

• Agilent Technologies, „Pesticide Dynamic MRM Compound Database for Screening and Identification using the Agilent LC/MS Triple Quadrupole Systems“, publikace č. 5990-4255EN, 2009.