Determination of Nitrosamine Impurities in Losartan Potassium Drug Substance and Drug Product using the Xevo TQ-S micro and Atlantis Premier BEH C18 AX Column

Význam tématu

Testování přítomnosti nitrosaminů v léčivých látkách a léčivých přípravcích je klíčové vzhledem k jejich karcinogennímu potenciálu a přísným regulatorním požadavkům. Nitrosaminy jako NDMA, NDEA a NMBA se mohou do finálních produktů dostat jak z výchozí suroviny, tak jako vedlejší produkty syntézy či při nevhodném skladování. Precizní a citlivá analýza na úrovni sub-ppm je proto zásadní pro zajištění bezpečnosti pacientů a souladu s doporučeními FDA.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout robustní a reprodukovatný kvantitativní postup pomocí UPLC-MS/MS pro stanovení tří nitrosaminů (NDMA, NDEA, NMBA) v aktivní látce a hotovém léčivém přípravku Losartan Potassium. Metoda měla splňovat limity FDA s LOQ ≤0,5 ng/ml a poskytovat spolehlivou extrakční účinnost i při nízkých koncentracích.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém: ACQUITY UPLC I-Class
• Kolona: Atlantis Premier BEH C18 AX, 1,7 μm, 2,1×100 mm, 40 °C
• Mobilní fáze A: 5 mM amonný formiát/0,1% formiová kyselina ve vodě
• Mobilní fáze B: 5 mM amonný formiát/0,1% formiová kyselina v methanolu
• Průtok: 0,45 ml/min, objem injekce: 10 μl, teplota vzorku: 10 °C
• Detekce: Xevo TQ-S micro, APCI+, sonda 300 °C, corona 2 μA, cone gas 100 l/h, desolvation gas 1200 l/h
• Software: MassLynx v4.2, TargetLynx pro kvantifikaci

Hlavní výsledky a diskuse

• Retence: Atlantis Premier BEH C18 AX prokázala výrazně lepší zadržení polarního NDMA než srovnatelná Fluorophenyl kolona, což zlepšilo separaci od matričních interferencí.
• Lineárnost: NDMA a NDEA 0,5–100 ng/ml, NMBA 1–100 ng/ml, R2 >0,997.
• Citlivost: LOQ definováno na 0,5 ng/ml (S/N ≥10) pro všechny analyty, splňuje FDA limit 0,03 ppm.
• Opakovatelnost: %RSD <12 % při 1 ng/ml (n=10).
• Extrakční účinnost: 70–116 % ve vzorcích Losartan Potassium DS a DP při předchozím nasycení 2,5 ng/ml.

Přínosy a praktické využití metody

• Schopnost spolehlivě kvantifikovat nitrosaminy pod úrovní 0,001 ppm v agrofarmaceutickém i hotovém přípravku.
• Vysoká selektivita díky MRM režimu a interním standardům (NDMA-d₆, NDEA-d₄, NMBA-d₃).
• Robustnost a reprodukovatelnost vhodná pro rutinní QC a validace analytických procesů.
• Rychlá analýza s krátkou celkovou dobou běhu, šetřící laboratořské zdroje a náklady.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit na další nitrosaminové nečistoty i jiné API s podobnými analytickými požadavky. Předpokládá se integrace moderních stacionárních fází optimalizovaných pro polaritu, využití zelených rozpouštědel a automatizovaných on-line extrakcí. Dále se otevírá prostor pro aplikaci strojového učení při zpracování velkých objemů dat a prediktivní úpravě metod.

Závěr

Vyvinutá UPLC-MS/MS metoda poskytuje citlivé, selektivní a spolehlivé stanovení nitrosaminů v Losartan Potassium DS a DP. Splňuje limity FDA, nabízí vysokou retenci polarních sloučenin a dobrou extrakční účinnost. Je vhodná pro implementaci v rutinním analytickém a kontrolním prostředí.

Reference

• U.S. Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research. Control of nitrosamine impurities in human drugs. Revision 1, February 2021.
• Lee J.-H., Lee S.-U., Oh J.-E. Analysis of nine nitrosamines in water by combining automated solid-phase extraction with HPLC-APCI-MS/MS. Int. J. Environ. Anal. Chem., 93(12), 1261–1273 (2021).