Analyzing Monoclonal Antibody (mAb) Fragments and Dimers Using Size Exclusion Chromatography (SEC)

Význam tématu

Analýza nízkomolekulárních fragmentů a vysokomolekulárních agregátů monoklonálních protilátek je klíčovou součástí kontroly kvality bioterapeutik. Velikostní varianty mohou vyvolat imunogenní reakce a ovlivnit účinnost či farmakokinetiku léčiv. Použití SEC zajišťuje spolehlivou separaci na základě hydrodynamického poloměru bez nespecifických interakcí.

Cíle a přehled studie

Cílem textu je představit vlastnosti a výhody sloupců Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1,9 µm pro rychlou a vysoce rozlišenou analýzu fragmentů a agregátů monoklonálních protilátek. Studie demonstruje:

• mechanickou stabilitu sloupců při stovkách injekcí,
• optimální separaci monomerů, dimerů a fragmentů v rámci jediné analýzy,
• vliv mobilní fáze (iontová síla, pH, organické modifikátory) a provozních podmínek (teplota, průtok).

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC System
• AdvanceBio SEC 200 Å 1,9 µm kolony (4,6×300 mm)
• Detektor UV při 220 nm a 280 nm

Použitá metodika

Separace probíhala na koloně s póry 200 Å a částicemi 1,9 µm při průtoku 0,35 mL/min, teplotě 25 °C a mobilní fázi 150 mM fosfátového pufru pH 7,0. Vzorkem byl stresovaný mAb roztok, analyzovaný během opakovaných injekcí pro potvrzení stability sloupce.

Hlavní výsledky a diskuse

Sloupec vykázal méně než 2 % pokles efektivity separace po 400 injekcích, což podtrhuje jeho mechanickou odolnost. Chromatogram ukázal jasné oddělení agregátů, monomerů a fragmentů během 10 min. Úpravy iontové síly, pH (rozsah 2,0–8,5), teploty (10–30 °C) a organických přísad (5–10 % EtOH, DMSO) umožňují optimalizovat rozlišení i stabilitu proteinů.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a reprodukovatelná analýza velikostních variant bioterapeutik.
• Snížení rizika sekundárních interakcí díky hydrofilní povrchové chemii sloupců.
• Vhodné pro rutinní QA/QC v bioprodukci i výzkumných laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

S rostoucí poptávkou po přesných a vysokorychlostních analýzách se očekává další vývoj SEC materiálů s menšími částicemi, širším rozsahem pórů a vylepšenou inertností. Integrace s natívními MS systémy a automatizovanými platformami umožní ještě citlivější charakterizaci vyšších řádů agregátů a konjugátů.

Závěr

Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1,9 µm kolony nabízejí špičkovou mechanickou stabilitu a vynikající rozlišení fragmentů i agregátů monoklonálních protilátek. Díky optimalizovaným provozním podmínkám a inertnímu povrchu představují spolehlivou volbu pro rutinní i pokročilé aplikace v analytické chemii bioterapeutik.

Reference

• Fast Separations for Aggregates and Fragments with AdvanceBio SEC columns – 5994-0873EN
• Size Exclusion Chromatography Analysis of a Monoclonal Antibody and Antibody Drug Conjugate – 5994-0827EN
• Agilent AdvanceBio SEC 1.9 µm Column User Guide – 5994-0739EN