VITATOX: Stanovení gancikloviru v séru

Význam tématu

Infekce herpetickými viry včetně cytomegaloviru (CMV) významně ohrožují pacienty se sníženou imunitou, zejména po transplantaci nebo v souvislosti s onkologickou léčbou či HIV. Ganciklovir je klíčové antivirotikum pro léčbu a prevenci těchto infekcí. Monitorování jeho hladin v séru (TDM) napomáhá optimalizovat dávkování, minimalizovat nežádoucí účinky a snižovat riziko terapeutického selhání či rezistence.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat jednoduchou, reprodukovatelnou a citlivou LC–MS/MS metodu pro kvantifikaci gancikloviru v lidském séru. Metoda byla aplikována na vzorky pacientů po transplantaci plic a dalších solidních orgánů (SOT) či hematopoetické transplantaci (HSCT), stejně jako u novorozenců s CMV infekcí.

Použitá metodika a instrumentace

Příprava vzorku probíhala srážením proteinu 5% trichloroctovou kyselinou a následnou centrifugací. Supernatant se neutralizoval NaOH a podával do chromatografu.

• HPLC část: Kolona Intersil ODS-3V (4,6×150 mm, 5 µm), mobilní fáze 25 mM NaH2PO4 (pH 2,5) s acetonitrilem a methanolem, interní standard 5-fluoro-2ʹ-deoxyuridin, přístroj Agilent 1260.
• LC–MS/MS část: Kolona Eclipse Plus-C18 (3,0×50 mm, 1,8 µm), Agilent 6470 MS/MS s ionizací AJS ESI+; optimalizované podmínky suchého a oblakového plynu, kapilární napětí 3000 V.

Hlavní výsledky a diskuse

Validace metody prokázala vysokou opakovatelnost (CV 4,2–5,1 %) a reprodukovatelnost (CV 4,9–5,3 %), bias do 8,7 %. Mez detekce byla stanovena na 0,01 mg/l a LOQ na 0,1 mg/l. Stabilita vzorku byla zajištěna až 6 měsíců v hlubokém mrazu a vzorky v autosampleru zůstaly stabilní 14 dní. U 49 pacientů po transplantaci plic bylo 42 % hladin nižších, 37 % v terapeutickém rozmezí a 21 % nad ním. Analýza 390 vzorků pacientů SOT/HSCT prokázala podobné rozdělení výsledků. U předčasně narozené holčičky s CMV infekcí metoda umožnila rychlé přizpůsobení dávky podle dynamiky koncentrací.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou citlivost a specificitu pro ganciklovir, rychlé zpracování vzorků a možnost integrace do rutinního TDM. Podporuje individualizované dávkování u kritických skupin pacientů, minimalizuje riziko myelosuprese a zvyšuje účinnost léčby.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření multiplexních LC–MS/MS metod pro souběžné sledování antivirotik a imunomodulancií. Dále se předpokládá automatizace přípravy vzorků, zrychlení analýzy a integrace do laboratorních informačních systémů. Vývoj nových interních standardů a kalibračních strategií může zlepšit přesnost a flexibilitu metody.

Závěr

Byla úspěšně zavedena robustní LC–MS/MS metoda pro stanovení gancikloviru v séru s dostatečnou citlivostí, reproducibilitou i stabilitou. Metoda je doporučena pro TDM u pacientů s vysokým rizikem a vyžaduje spolupráci laboratoře, farmakologa a klinika pro optimální dávkování.

Reference

• Klapková E., Dunovská K., Petrus J. Stanovení gancikloviru v séru. Ústav lékařské chemie a klinické biochemie 2. LF UK a FN Motol.
• Česká společnost klinické biochemie. Doporučení pro validace a verifikace postupů laboratorních vyšetření ve zdravotnických laboratořích. 03/2021.