A Qualified Method for Quantification of Reserpine in Protein-Precipitated Human Plasma Using Xevo G2-S Time-of-Flight Mass Spectrometr

Význam tématu

Analýza reserpinu v lidské plasmě je klíčová pro vyhodnocování farmakokinetických profilů a metabolických drah v rané fázi vývoje léčiv. Vysoce citlivé a selektivní metody umožňují přesné stanovení léčiv a jejich metabolitů v komplexních biologických matricích.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl vytvořit a kvalifikovat univerzální LC–MS metodu s vysokým rozlišením pomocí časově-of-letové hmotnostní spektrometrie (QTof) pro kvantifikaci reserpinu v proteinem precipitované lidské plazmě. Metoda byla validována třídenním testem splňujícím přísná bioanalytická kritéria z hlediska linearity, citlivosti, přesnosti a správnosti měření.

Použitá metodika

Vzorky byly připraveny srážením plazmy acetonitrilem (3:1, v/v), následovanou centrifugací a ředěním supernatantu vodou. Kalibrační řada vznikla sériovou dilucí standardu reserpinu od 100 ng/mL do 0,003 ng/mL. Pro chromatografii byl použit gradient na C18 kolonce (2,1 × 100 mm, 1,7 μm) při průtoku 0,6 mL/min po dobu 9 minut. Data byla získávána v režimu MS scan a po-rekordní korekci pro zajištění přesného měření iontových chromatogramů pro reserpin ([M+H]+ 609,28 ± 0,05 Th).

Použitá instrumentace

• ACQUITY UPLC I-Class System
• ACQUITY UPLC C18 Column (2,1 × 100 mm, 1,7 μm)
• Xevo G2-S QTof Mass Spectrometer se StepWave a QuanTof technologiemi
• LockSpray s leucine encephalinem jako referenčním standardem
• MassLynx Software s TargetLynx Application Manager

Hlavní výsledky a diskuse

Reserpin elutoval při retenčním čase cca 5,85 min s ostrým symetrickým píkem (šířka 1,3 s v poloviční výšce). LLOQ činilo 0,049 ng/mL (S/N > 10) a LOD < 0,024 ng/mL. Lineární oblast pokrývá 0,048–100 ng/mL (3,3 dekády) s korelačním koeficientem r2 ≥ 0,9989. Mezi-denní přesnost (%CV) a bias byly v rámci ±15 %. QC vzorky vykázaly %CV do 9,6 % a bias do –8,8 %, což splňuje obvyklé bioanalytické směrnice.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje kombinovaný kvali-kvali screening v jedné analýze, zkracuje dobu běhu na 9–10 minut a nabízí široký dynamický rozsah porovnatelný s triple kvadrupólovými přístroji. Současně poskytuje informace o parentálních sloučeninách i jejich metabolitech, i když nejsou dostupné standardy metabolitů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj v oblasti datové analýzy a vyšší rozlišení QTof přispějí k podrobnějšímu mapování metabolitů. Integrace s datově nezávislým sběrem dat (DIA) a automatizovanými pracovními postupy rozšíří využití v DMPK studiích, metabolomice a biomarkerových aplikacích.

Závěr

Vyvinutá LC–MS QTof metoda pro stanovení reserpinu v proteinem precipitované plazmě prokázala vysokou citlivost, linearitu, přesnost a správnost měření. Třídenní kvalifikační studie potvrdila splnění přísných bioanalytických požadavků a vhodnost metody pro rutinní bioanalytické aplikace.

Reference

• Dorschel C., Alelyunas Y., Wrona M., Rainville P. A Qualified Method for Quantification of Reserpine in Protein-Precipitated Human Plasma Using Xevo G2-S Time-of-Flight Mass Spectrometry. Waters Corporation, May 2013.