Matrix Factor Determination for Clopidogrel Using Post-Column Infusion (PCI) Capabilities of UNIFI Software

Význam tématu

LC-MS/MS je klíčová technika kvantitativní bioanalýzy díky vysoké citlivosti a selektivitě.
Matricové efekty (iontové potlačení/zvýraznění) mohou významně ovlivnit přesnost a reprodukovatelnost výsledků.
Stanovení matričního faktoru je proto nezbytnou součástí vývoje a validace bioanalytických metod.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo demonstrovat jednoduchý a plně automatizovaný postup pro stanovení matričního faktoru klopidogrelu pomocí post-column infusion (PCI) na systému Xevo TQ-S a UNIFI Software.
Součástí byla analýza vlivu různých stupňů hemolýzy plazmy (5 %, 10 %, 15 %) na potlačení signálu.

Použitá metodika a instrumentace

• UPLC podmínky: ACQUITY UPLC s BEH C18 kolonkou (1.7 µm, 2.1×50 mm), 600 µL/min, 45 °C, gradient 5→95 % acetonitrilu s 0.1 % kyselinou mravenčí za 2 min.
• MS detekce: Xevo TQ-S, pozitivní ESI, přechody 322.1→212.1 pro klopidogrel a 326.1→216.1 pro d4-klopidogrel, kapilární napětí 1.00 kV, kolizní energie 16 eV, kužel 35 V.
• Příprava vzorků: tři úrovně hemolýzy v lidské plazmě, extrakce precipitací proteinů metanolem, infuzní roztoky klopidogrelu 10, 50, 100 ng/mL.
• Software: UNIFI Scientific Information System s typem analýzy post-column infusion pro automatické výpočty matričního faktoru a normalizovaného faktoru.

Hlavní výsledky a diskuse

• Matriční faktor klopidogrelu bez normalizace se pohyboval mezi 0.70–0.86 (12–30 % potlačení) napříč koncentracemi.
• Nebyl pozorován významný rozdíl v potlačení signálu mezi vzorky s různými stupni hemolýzy.
• IS-normalizovaný matriční faktor dosahoval průměrných hodnot 1.06–1.11 s nízkou variabilitou (CV ≤10 %), což naznačuje účinnou kompenzaci potlačení.
• UNIFI poskytuje přehledné statistické shrnutí (průměr, odchylka, CV) i chromatografické/grafické výstupy bez potřeby externího software.

Přínosy a praktické využití metody

• Integrované výpočty eliminují nutnost tabulkových procesorů.
• Rychlá a jednotná validace matričních efektů v souladu s FDA a EMEA směrnicemi.
• Možnost zahrnout hemolyzované vzorky pro komplexní hodnocení bioanalytické metody.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření postupu na další farmaceutické látky a bioanalytické aplikace.
• Integrace pokročilé datové analýzy nebo strojového učení pro predikci matričních efektů.
• Plná automatizace bioanalytického workflow od přípravy vzorků po závěrečnou zprávu.

Závěr

Postup post-column infusion ve spojení s UNIFI Software a Xevo TQ-S nabízí efektivní nástroj pro stanovení matričního faktoru klopidogrelu.
IS-normalizace zajišťuje přesnou kompenzaci potlačení signálu a výsledky potvrzují, že hemolýza plazmy nemá rozhodující vliv na potlačení.

Reference

• Guidance for Industry Bioanalytical Method Validation, FDA, 2001.
• Guideline on Bioanalytical Method Validation, EMEA, 2011.
• Eeckhaut A. Van et al. J. Chromatogr. B 877 (2009) 2198–2207.