Detection of THC Metabolites in Urine by LCMS- 8050 with Supported Liquid Extraction Method

Význam tématu

Kvantitativní stanovení metabolitů THC v moči je klíčové pro forenzní i klinické monitorování užívání konopí. Moč jako snadno dostupný biologický vzorek umožňuje zachycení hlavních metabolitů 11-OH-THC a THC-COOH, které díky vysoké stabilitě a délce detekce poskytují důkaz expozice látce i několik dní po požití. Vysoká citlivost a selektivita metody LC-MS/MS přináší spolehlivé výsledky pro rutinní screening i potvrzovací analýzy.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat metodu pro detekci a kvantifikaci metabolitů THC v moči. Byla zvolena kombinace enzymatické hydrolýzy, podporované extrakce kapalina-kapalina (SLE+) a analýza na Shimadzu LCMS-8050. Metoda byla navržena tak, aby splňovala kritéria UNODC pro MS detekci drog v biologických matricích.

Použitá instrumentace

• Shimadzu LCMS-8050 s triple kvadrupólovým analyzátorem a ESI v pozitivním módu
• Biotage ISOLUTE® SLE+ 1 mL kazeta pro podporovanou extrakci kapalina-kapalina
• Biphenylová kolona (100 mm × 2.1 mm, 2.6 µm)
• Mobilní fáze: A – 0.2 % kyselina mravenčí ve vodě, B – 0.2 % kyselina mravenčí v methanolu

Použitá metodika

• Enzymatická hydrolýza: 200 µL moči s vnitřním standardem a β-glukuronidázou při 37 °C po 1 h
• Podporovaná extrakce (SLE+): načtení vzorku, eluční kroky s dichlormethanem a isopropanolem (9:1) pro odstranění interferencí
• Suchá extrahovaná fáze, rekonstituce 100 µL 0.1 % kyselina mravenčí (60:40 MeOH:voda)
• Sledovaný gradient eluce: 0–1 min 5 % B, 1–2 min 40 % B, 2–7 min 100 % B, návrat na 5 % B do 14 min
• Sledované signály: MRM přechody pro THC-COOH (345.21>327.20*, 345.21>193.15) a 11-OH-THC (331.23>193.20*, 331.23>201.15), deuterované IS

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda splnila všech sedm kritérií UNODC: linearita s koeficientem R2 ≥ 0.992, LOQ 5 ng/mL (S/N > 10), extrakční výtěžnost 92–106 %, matrix effect 71–101 %, přesnost 90–106 % a precizita RSD < 9 %. Specifičnost byla potvrzena absencí interferencí ze skupin amfetaminů, opiátů či benzodiazepinů a různých typů moče. Díky vysoké afinitě metabolitů k organické fázi proběhla čistá extrakce a robustní analýza bez výrazných rušivých vlivů.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a reprodukovatelná příprava vzorku s minimem kroků
• Vysoká citlivost a selektivita pro forenzní a klinické aplikace
• Splnění přísných kritérií UNODC pro rutinní screening i potvrzovací analýzy
• Možnost snadné adaptace na další metabolity nebo látky zneužívané ve forenzní toxikologii

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace přípravy vzorku a využití on-line SLE
• Rozšíření panelu analyzovaných syntetických konopných látek a dalších drog
• Integrace umělé inteligence pro rychlou interpretaci dat a prediktivní modely
• Miniaturizace a multi-matricové přístupy pro komplexní toxikologické screeny

Závěr

Validovaná metoda na LCMS-8050 v kombinaci s podporovanou SLE extrakcí poskytuje citlivou, přesnou a specifickou analýzu THC metabolitů v moči. Díky splnění UNODC kritérií je vhodná pro rutinní forenzní i klinické testování, nabízí vysokou provozní efektivitu a možnost dalšího rozšíření spektra cílových látek.