Screening and Quantitation of 191 Mycotoxins and Other Fungal Metabolites in Almonds, Hazelnuts, Peanuts, and Pistachios Using UHPLC/MS/MS

Význam tématu

Mykotoxiny představují významné riziko pro lidské a zvířecí zdraví a často kontaminují potraviny v průběhu sklizně a skladování. Ořechy jsou častým zdrojem aflatoxinů a dalších toxických metabolitů plísní, přičemž data o širším spektru mykotoxinů byla dosud omezená.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl vyvinout a validovat multitargetní UHPLC/MS/MS metodu pro simultánní detekci a kvantifikaci 191 mykotoxinů a houbových metabolitů v mandlích, lískových ořeších, arašídech a pistáciích.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorkování a extrakce: 5 g homogenizovaných ořechů extrahovaných acetonitril/voda/kyselina octová (79/20/1) po dobu 90 min při rotačním míchání, následné 8násobné ředění.
• UHPLC: Agilent 1290 Infinity, kolona ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 (2.1 × 150 mm, 1.8 µm), gradient 21 min, 25 °C, 0.25 ml/min.
• MS/MS: Agilent 6460 Triple Quadrupole s Jet Stream ESI v pozitivním i negativním módu, dynamické MRM, 304/70 přechodů.
• Kalibrace: 7bodové křivky v roztoku (lineární, 1/x vážené), LLOQ stanovena na S/N>10.
• Validace: 65 klíčových látek v 4 matrixech; hodnocení linearity, opakovatelnosti, recoveries, maticových efektů.

Hlavní výsledky a diskuse

• Všechny analyty prokázaly linearitu přes tři řády (R2>0.99), LLOQ od 0,04 do stovek µg/kg.
• Aparantní recoveries 70–120 % pro ~60 % kombinací; většina s SD<10 %.
• Extraktační recoveries ≥50 % u poloviny látek, nižší u fumonisinů.
• Maticové efekty ±20 % u 57 % látek; u raně elujících potlačení, u některých látek až 295 % zvýšení signálu.
• V 53 realných vzorcích ořechů detekováno 40 metabolitů; nejčastější beauvericin, enniatin B, macrosporin, 3-nitropropionová kyselina.
• V několika případech překročeny EU limity pro aflatoxin B1; poprvé potvrzeno výskyt T-2 a HT-2 toxinu v lískových ořeších.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlé simultánní screenování rozsáhlého spektra mykotoxinů.
• Jednoduchá příprava vzorku bez složitého clean-up.
• Vhodné doplnění rutinních QC programů a rozšíření dat o kontaminaci.

Budoucí trendy a možnosti využití

Budoucí vývoj směřuje k použití stabilních izotopových standardů, optimalizaci extrakce pro specifické skupiny mykotoxinů a rozšíření metod na další matrixy. Je také nezbytné studovat synergické účinky kombinovaných kontaminantů a jejich toxikologické hodnocení.

Závěr

Předložená UHPLC/MS/MS metoda nabízí robustní, citlivé a efektivní řešení pro multitargetní analýzu mykotoxinů v ořeších. Validace pro nejvýznamnější toxiny prokázala vysokou linearitu, reprodukovatelnost a vhodnost pro rutinní monitorování i výzkum rozšíření kontaminace.

Reference

• Varga E. et al. Anal. Bioanal. Chem. 405(2013)5087–5104.
• Zöllner P., Mayer-Helm B. J. Chromatogr. A 1136(2006)123–169.
• Commission Regulation (EC) No.1881/2006 a změny.
• Commission Recommendation 2013/165/EU.
• Chen Y., Cappozzo J., Stone PJ. Agilent 5990-6894EN (2011).
• Varga E. et al. Agilent 5991-2808EN (2013).