Improved Analytical Workflow for Phospholipids by Nexera-e and Co-Sense for Impurities

Význam tématu

Aplikace dvourozměrné kapalinové chromatografie (2D-LC) představuje průlomový přístup pro analýzu složitých směsí fosfolipidů v biologických vzorcích. Díky kombinaci odlišných separačních mechanismů je možné detailně charakterizovat polaritu hlav fosfolipidů a zároveň rozlišit délku alkylových řetězců. Tento postup zvyšuje citlivost, selektivitu a spolehlivost výsledků ve srovnání s klasickými jednorozměrnými metodami.

Cíle a přehled studie / článku

Článek L472 představuje metodiku pro komplexní separaci glycerofosfolipidů (GPLs) pomocí systému Nexera-e doplněného o modul Co-Sense for Impurities. Hlavními cíli bylo:

• Rozdělit GPLs do skupin podle typu polární hlavice (PG, PE, PI, PS, PC) v první dimenzi.
• Rozlišit délku a stupeň nenasycenosti alkylových řetězců v druhé dimenzi.
• U vybraných frakcí PG a PS zvýšit citlivost a odstranění rušivých složek pomocí Co-Sense for Impurities.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika integruje dvě oddělené separační fáze:

• První dimenze (normal phase) na Nexera-e pro rozdělení podle polární hlavice.
• Druhá dimenze (reversed phase) na Nexera-e pro separaci dle délky řetězců.
• Heart-cut sběr frakcí PG a PS, vyčištění a obohacení na Co-Sense for Impurities (trapovací kolonky a zpětná analýza).

Hlavní instrumentace:

• Nexera-e system pro 2D-LC
• Shimadzu LCMS-8050 (ESI, MRM režim) pro detekci a kvantifikaci.
• Co-Sense for Impurities modul (Shim-pack XR-SIL, HILIC guard, ODS kolony).

Hlavní výsledky a diskuse

2D separace ukázala výrazné zlepšení rozlišení jednotlivých fosfolipidových tříd ve srovnání s jednorozměrnou RP-LC:

• Klarita konturového grafu MRM přechodů všech GPLs usnadňuje vizualizaci a porovnávání vzorců.
• Skupiny PE, PC, PG, PI a PS jsou jasně rozděleny, ale u PG a PS byla separace v některých pásmech nedostatečná.
• Po aplikaci Co-Sense for Impurities došlo k významnému zvýšení citlivosti u PG (16:0-18:1) a ke snížení interferencí u PS (18:1-18:1).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje:

• Rychlou a robustní analýzu komplexních biologických matrik.
• Cílenou detekci a kvantifikaci i stopových množství fosfolipidů.
• Flexibilní kombinaci průběžného screeningu a detailního šetření vybraných frakcí.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace dalších detektorů (HR-MS) pro rozšířenou strukturální charakterizaci.
• Automatizované heart-cut protokoly pro více frakcí současně.
• Využití v klinických a potravinářských aplikacích pro biomarkerovou analýzu a kontrolu kvality.

Závěr

Kombinace Nexera-e a Co-Sense for Impurities představuje účinný nástroj pro komplexní a cílenou analýzu glycerofosfolipidů. Metoda nabízí vysokou citlivost, selektivitu a flexibilitu pro aplikace v metabolomice, biotechnologiích a průmyslové analytice.

Reference

• Application News L472, Shimadzu Corporation, 2015.