Evaluation of SEC Columns for Analysis of ADC Aggregates and Fragments

Význam tématu

Antibody–drug conjugáty (ADC) představují inovativní přístup pro specifickou dodávku cytotoxických látek k cílovým buňkám, využívající monoklonální protilátky. Kvalitativní a kvantitativní stanovení jejich agregátů a fragmentů je klíčové pro kontrolu kvality bioterapeutik.

Cíle a přehled studie / článku

Studie porovnává výkonnost tří komerčně dostupných SEC kolon se zaměřením na minimalizaci nespecifických interakcí a optimalizaci separace agregátů a monomerů dvou modelových ADC: trastuzumab emtansine (Lys-vázaný) a brentuximab vedotin (Cys-vázaný).

Použitá metodika a instrumentace

Analýza probíhala na UHPLC s UV detekcí při 214 nm. Jako mobilní fáze byla použita fosfátově pufrovaná solná suspenze (PBS, pH 6,8–7,4) s případným přídavkem NaCl (100–300 mM). Testované kolony:

• Agilent AdvanceBio SEC 300 Å, 2,7 µm
• Vendor 1 SEC 200 Å, 1,7 µm
• Vendor 2 SEC 300 Å, 1,8 µm

Metodické parametry: 4,6 × 300 mm, průtok 0,35 mL/min, teplota 30 °C, objem injekce 5 µL pro trastuzumab a 10 µL pro brentuximab.

Hlavní výsledky a diskuse

Agilent AdvanceBio SEC prokázala nejnižší úroveň šíření a omezila tailing faktor do hodnoty ~1,35 u Lys-vázaného ADC a ~1,47 u Cys-vázaného. Kolony Vendor 1 a Vendor 2 vykazovaly vyšší nelineární interakce, nižší rozlišení (0,65–1,42) a u Vendor 1 dokonce rozdělené špičky. Optimalizace pH odhalila, že pH 7,4 poskytuje nejlepší rozlišení dimerů a monomerů. Zvýšení koncentrace NaCl do 300 mM nevedlo k významnému zlepšení separace.

Přínosy a praktické využití metody

Volba optimálního silikonového nosiče s hydrofilní povrchovou úpravou eliminuje většinu nespecifických interakcí, což umožňuje spolehlivé stanovení procenta agregátů a monomerů bez použití organických modifikátorů. Metoda je vhodná pro QA/QC laboratorní provoz biotechnologických výroben.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj SEC kol se zaměřením na specifické povrchové technologie a nanopartikulární formy slibuje další zlepšení citlivosti a rozlišení. Kombinace s hmotnostní spektrometrií a multidetektorovými přístupy by mohla doplnit kvalitativní charakterizaci ADC a urychlit validaci metod.

Závěr

Pro analýzu agregátů a fragmentů ADC představuje nejvhodnější náplň Agilent AdvanceBio SEC 300 Å, 2,7 µm. Optimalizace pH mobilní fáze na 7,4 zajišťuje nejlepší rozlišení a vysokou reprodukovatelnost. Aplikace metody přináší robustní platformu pro QC testování komplexních bioterapeutik.

Reference

Agilent Technologies, Inc. Application Note 5994-3276EN (2021)