Ultrafast Analysis of Benzodiazepines in Urine by the Agilent RapidFire High-Throughput Triple Quadrupole Mass Spectrometry System

Význam tématu

Analýza benzodiazepinů v moči je zásadní pro forenzní toxikologii a klinickou diagnostiku. Zvýšené požadavky na rychlost a kapacitu vyšetření vedou k hledání alternativ k tradičním LC/MS a GC/MS metodám, které jsou časově a provozně náročné.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout ultrarychlou kvantitativní metodu pro pět běžných benzodiazepinů v moči (alpha-hydroxyalprazolam, lorazepam, temazepam, oxazepam, 7-aminoclonazepam) s použitím systému Agilent RapidFire High-Throughput Triple Quadrupole Mass Spectrometry, dosahující cyklu pod 15 sekund na vzorek.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky moči byly předúpravou inkubovány s beta-glukuronidázou (55–60 °C, 2 h), následně naředěny 1:50 a analyzovány pomocí:

• Agilent RapidFire 365 (SPE moduly s C4 kartridží)
• Agilent 6490 Triple Quadrupole MS
• MassHunter Qualitative a Quantitative Analysis B.05.00
• Vybraný try-to-monitoring (MRM) pro analyty a interní standard nordiazepam-D5
• Pracovní pufry A (voda), B (10 % acetonitril), C (50:50 methanol:isopropanol + 0,1 % kyselina mravenčí)
• Tokové podmínky: 1,5 mL/min (A), 1,25 mL/min (B,C)

Hlavní výsledky a diskuse

• Lineární rozsah 50–12 500 ng/mL, koeficienty determinace R² > 0,99
• Limity detekce pod 25 ng/mL
• Přesnost a správnost (accuracy 95–105 %, precision <10 %) intra- a interdnevně
• Rychlost analýzy: 14 s na vzorek, >250 vzorků/hod
• Minimální matrixové potlačení a nízké riziko carry-over (doporučená vložená prázdná injekce nad 6 250 ng/mL)

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zkracuje dobu analýzy více než desetkrát oproti standardní LC/MS/MS, při zachování vysoké citlivosti a spolehlivosti. Je vhodná pro forenzní laboratoře, klinické screeningy i rutinní QA/QC v průmyslové analytice.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření panelu na další psychoaktivní látky
• Automatizace přípravy vzorků a on-line integrace do LIMS
• Využití miniaturizovaných SPE kartridží pro úsporu reagentů
• Vývoj multiplexních metod pro simultánní detekci desítek látek
• Implementace v mobilních laboratořích pro rychlé forenzní zásahy

Závěr

Vyvinutá ultrarychlá SPE/MS/MS metoda na systému Agilent RapidFire významně zvyšuje throughput a flexibilitu analýzy benzodiazepinů v moči, aniž by byla obětována analytická výkonnost. Přináší reálnou alternativu k tradičním LC/MS/MS přístupům v forenzní a klinické praxi.

Reference

Parikh N. R., Romm M., Miller V. P. Ultrafast Analysis of Benzodiazepines in Urine by the Agilent RapidFire High-Throughput Triple Quadrupole Mass Spectrometry System. Agilent Technologies Application Note 5991-0833EN, 2014.